本周二,，上海滬鼎王陪同技術人員完成ATCC細胞培養(yǎng)過程實驗。

培養(yǎng)ATCC細胞的基本原理：  
    通過在支持物上培養(yǎng)貼壁細胞,，這里所說的支持物涵蓋很多,，比如說蓋玻片?？梢詰每贵w檢測細胞表面抗原的表達或進行酶細胞化學以及免疫細胞化學檢測,。該方法的優(yōu)點是細胞貼壁牢固，能夠維持細胞生長時的狀態(tài),。

試劑和設備：
1,、細胞懸浮液；
2,、6孔平底組織培養(yǎng)板,，或φ60 mm培養(yǎng)皿； 
3,、18mm x 18mm 或20mm x 20mm浸于75%乙醇中的蓋玻片,； 
4、含血清培養(yǎng)基（通常為 RMPI 1640,含10% 小牛血清,，100U/ml青霉素,，100μg/ml鏈霉素）；
5,、超凈工作臺,；
6、CO2孵箱,； 
7,、蓋片鑷；

操作的過程步驟方法：
1,、用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,，用無菌絲綢布擦拭干凈,，不要用紗布；
2,、將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）,；
3、在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時,；
4,、將經過計數的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中,；
5,、將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,，將培養(yǎng)板取出,，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測,。 

實驗過后，我公司王提出實驗過程中的一些要點以及說明：
1,、本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng),，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法,；
2,、所使用的蓋玻片應該為玻璃制造，并經過鉻酸洗液處理,；
3,、蓋玻片非常薄，易碎,，取放蓋玻片時動作要輕,；
4、如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞,，可以使用較大的培養(yǎng)皿,，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率,；
5,、如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干,。