貝氏柯克斯體(俗稱Q熱立克次體)是常見的人畜共患病Q熱的病染原體。由于Q熱臨床表現(xiàn)多樣,，臨床上常誤診為傷寒,、上呼吸道感染、肺炎,、肝炎等［1］,，因而簡便而實用的診斷和流行病學調(diào)查方法的建立，對Q熱病的診,、防,、治均有重要意義。我們建立的免疫金法檢測Q熱立克次體,，初步證明快速而實用,，現(xiàn)將結果報告如下。
一,、材料與方法
1.Q熱立克次體株及對照菌株：Q熱立克次體七醫(yī)株(Ⅰ相和Ⅱ相),，李株(Ⅰ相)，YS-8株(Ⅰ相),，Henzerling株(Ⅰ相)和九里株(Ⅱ相)及普氏立克次體均為我室保存,，嗜肺軍團菌LP6，LP8抗原由大坪醫(yī)院檢驗科惠贈,，綠膿假單胞菌PN103株,，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌由本室保存,。
2.鼠抗Q熱立克次體Ⅰ相單抗雜交瘤1B1D4D8(Ⅰ相elisa效價＞1∶12 800,，Ⅱ相效價＜1∶3 200)由本室自制。按文獻［2］報道的方法標記成10 nm的膠體金探針,。
3.用兔抗Q熱立克次體免疫血清包被硝酸纖維素膜(NC膜孔徑0.45 μm),，參照文獻［2］介紹的方法建立Q熱立克次體的免疫金檢測法(DIGFA)。
4.用所建立的DIGFA檢測實驗感染豚鼠血,、小鼠肝脾及蜱標本中的Q熱立克次體,。實驗動物的感染按我室常規(guī)進行，其中豚鼠采集感染后6,、11,、16、30 d取血分離的白細胞16份,；小鼠肝,、脾標本40份，采自20只昆明鼠受染后2,、4,、6、8,、10,、12、14,、20,、30 d，稱量后,，用去離子水研磨成5%的懸液,，1 000 g離心15 min，取上清液待檢,；感染Q熱立克次體的非洲鈍緣蜱血淋巴和成蜱及其卵,，下代幼蟲懸液標本共8份。
二,、結果
1.探針的特異性試驗結果如表1所示,。
表1 免疫金探針特異性試驗結果
Q熱立克次體菌株結果對照菌株結果七醫(yī)株顆粒性抗原++++普氏立克次體-七醫(yī)株超聲粉碎抗原++++綠膿假單胞菌PN103-九里株++++嗜肺軍團菌Lp6-李株+++嗜肺軍團菌Lp8-Henzerling株++大腸埃希菌-Ys-8株+++金黃色葡萄球菌-七醫(yī)株Ⅱ相+/-陰性對照-
注：以Q熱立克次體七醫(yī)株檢測結果為++++，陰性對照為-度量各菌株試驗結果 2.敏感性試驗：取各種稀釋度的純凈顆粒性七醫(yī)株Ⅰ相抗原各50 μl點于同一硝酸纖維素膜中,，制成13個斑點,。用膠體金探針做檢測，經(jīng)3次重復均只有前4個斑點為陽性,，即10-3,，相當于50 ng的Q熱立克次體抗原,。
3.實驗感染標本檢測：豚鼠感染立克次體后，不同時間內(nèi)采血,，用DIGFA檢測結果：小鼠感染后2 d即可用DIGFA檢測到肝,、脾中立克次體抗原，6 d陽性zui強,，8 d減弱,，12 d后檢測為陰性，該結果與感染后小鼠脾印片經(jīng)常規(guī)姬姆薩染色所見的立克次體消長相吻合,。對照小鼠標本檢測均陰性,。受染蜱血淋巴和成蜱懸液經(jīng)檢測為陽性，而其卵,、下代幼蟲及正常蜱標本均為陰性,。
三、討論
聚合酶鏈反應(PCR)和核酸探針檢測立克次體,，特異性和敏感性均很好［3］,，但難以推廣。我們將多個標本點于同一張NC膜上進行批量標本的DIGFA檢測,，且直接檢測顆粒性Q熱立克次體抗原(目前文獻報道的多是檢測抗體,，如登革熱病毒抗體［4］，流行性出血熱病毒抗體［5］等),，有很好的特異性,。敏感性試驗結果表明，該法至少可檢出50 ng的Q熱立克次體抗原,。
DIGFA檢測豚鼠血液中Q熱立克次體的方法,，可能進一步應用于Q熱病人的快速診斷。用DIGFA檢測受染小鼠脾臟的結果與常規(guī)姬姆薩染色所見的Q熱立克次體在脾臟中的消長相吻合,，故可望應用于Q熱自然疫源地調(diào)查中野外嚙齒動物臟器的檢查,。
參考文獻
1 俞樹榮.編著.Q熱的病原與防治.北京：科學技術文獻出版社, 1990.42-45.
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3 余全，俞樹榮.用DNA探針技術檢出Q熱立克次體.中華微生物學和免疫學雜志,，1994,，14：349-351.
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5 趙中夫, 郭進軍, 閻小君. 滴金免疫法快速檢測腎綜合征出血熱血清特異性IgM的研究. 中華醫(yī)學檢驗雜志, 1998, 21: 96-98.