一,、細(xì)胞和組織
免疫組織化學(xué)技術(shù)是用標(biāo)記物或顯色物標(biāo)記的抗體檢測(cè)細(xì)胞和組織內(nèi)的抗原,，從而達(dá)到診斷和研究疾病的目的,?？乖臏?zhǔn)確顯示和定位與制備的細(xì)胞和組織標(biāo)本質(zhì)量的好壞有著密切的。由于各種抗原的生化,、物理性質(zhì)不同,，如溫度高低、酸堿度強(qiáng)弱及各種化學(xué)試劑的作用均可影響抗原的免疫學(xué)活性,，良好的細(xì)胞和組織學(xué)結(jié)構(gòu)將有助于抗原的準(zhǔn)確定位,。因此，細(xì)胞和組織標(biāo)本的采集制備在免疫組織化學(xué)技術(shù)中占有十分重要的位置,。
（一）細(xì)胞標(biāo)本的取材
目前,，免疫組化技術(shù)已經(jīng)應(yīng)用于細(xì)胞學(xué)診斷，如鑒別低分化癌與惡性淋巴瘤,、黑色素瘤,、低分化肉瘤等。CEA應(yīng)用于胸腹水中間皮瘤與癌的鑒別,。McAb應(yīng)用于淋巴白血病和惡性淋巴瘤的分類分型,。近年來(lái)，培養(yǎng)細(xì)胞的免疫組化技術(shù)在鑒定細(xì)胞的種類,、分化程度,、表面抗原特點(diǎn)以及腫瘤結(jié)構(gòu)成分改變等方面的研究均起到了積極作用,。
細(xì)胞標(biāo)本的取材有以下3種方法:
1．印片法 主要應(yīng)用于活組織檢查標(biāo)本和手術(shù)切除標(biāo)本,。新鮮標(biāo)本以zui大面積剖開(kāi)，充分暴露病變區(qū),，將載玻片輕輕壓于病變區(qū),，脫落的細(xì)胞便粘附在玻片上，立即浸入細(xì)胞固定液內(nèi)5-10min,，取出后自然干燥,，低溫保存?zhèn)溆谩?br />優(yōu)點(diǎn)是簡(jiǎn)便省時(shí)，細(xì)胞抗原保存較好,。缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻,，玻片上細(xì)胞重疊，影響標(biāo)記效果,。
2．穿刺吸取涂片法 主要應(yīng)用于實(shí)質(zhì)器官的病變區(qū),，如肝、腎、肺,、淋巴結(jié),、軟組織等。用細(xì)針穿刺吸取病變區(qū)內(nèi)液體成分,，如穿刺液較少,，可直接涂抹在載玻片上，力求細(xì)胞分布均勻,。如穿刺液較多,，細(xì)胞豐富，可用洗滌法：將穿刺液滴入盛有1-2ml hanks液（RPMi 1640液）的試管內(nèi),，輕輕攪拌,，以500rpm低速離心5-10min后，棄上清液,，將沉淀制成細(xì)胞懸液（濃度約2×106細(xì)胞/ml）,，吸取1滴于載玻片上，輕輕涂抹,，待涂片略干即可固定,。
該法穿刺吸取直接涂片的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，細(xì)胞形態(tài)保持較好,。缺點(diǎn)是細(xì)胞分布不均勻,。洗涂法片雖可彌補(bǔ)這一缺點(diǎn)，但操作復(fù)雜,，細(xì)胞常常發(fā)生變形,。
3．體液沉淀涂片法 主要用于胸水、腹水,、尿液,、腦脊液等體液多、細(xì)胞少的標(biāo)本,。體液采取后,，必須及時(shí)處理，更不宜加固定液,。根據(jù)標(biāo)本內(nèi)細(xì)胞數(shù)量的多少選用不同的處理方法：①細(xì)胞數(shù)量極多者,，可吸取少量液體直接涂在玻片上。②細(xì)胞數(shù)量較少者,，可將液體自然沉淀,，然后吸取5ml左右沉淀液，以1500rpm離心10min,，棄上清液,，將沉淀涂片,，略干后固定備用。
如用細(xì)胞離心涂片器(Cytospin ),，可將標(biāo)本用上述離心沉淀法制成2×106細(xì)胞/ml的細(xì)胞懸液,，吸取50μl加入涂片器內(nèi)，離心后即制成分布均勻的細(xì)胞涂片,，細(xì)胞分布在直徑約6mm的小圓圈內(nèi),，每個(gè)圓圈內(nèi)的細(xì)胞數(shù)約105個(gè)(Danos,1976)。
培養(yǎng)細(xì)胞標(biāo)本的取材可根據(jù)培養(yǎng)的細(xì)胞特性分別采取不同的方法,。某些細(xì)胞有貼壁生長(zhǎng)的特性,，如纖維母細(xì)胞、粘液癌細(xì)胞等,，只需將載玻片或蓋玻片插入培養(yǎng)液內(nèi)即可收集到理想的細(xì)胞標(biāo)本,。某些細(xì)胞只能在培養(yǎng)液中生長(zhǎng)，可用上述體液沉淀離心涂片法處理,。
制備細(xì)胞涂片應(yīng)注意：①標(biāo)本反復(fù)離心洗滌,，細(xì)胞的粘附性降低，在免疫組化染色過(guò)程中容易脫片,，因此,，在制備涂片前載玻片上應(yīng)涂粘附劑。②為節(jié) 省試劑和便于鏡下觀察和記數(shù),，應(yīng)將細(xì)胞集中到直徑0.6-1.0cm的圓圈內(nèi),，細(xì)胞總數(shù)以105個(gè)為宜。③粘液豐富的標(biāo)本,，如痰液,，胃液等，未經(jīng)特殊處理,，一般不宜作免疫組化標(biāo)記,。
（二）組織標(biāo)本的取材
組織標(biāo)本主要取之于活組織檢查標(biāo)本、手術(shù)切除標(biāo)本,、動(dòng)物模型標(biāo)本以及尸體解剖標(biāo)本等,。前三者均為新鮮組織,，后者是機(jī)體死亡2h以上的組織,，可能有不同程度的自溶，其抗原可能有變性消失,，嚴(yán)重彌散現(xiàn)象,，因此，尸檢組織應(yīng)盡快固定處理,，以免影響免疫組化標(biāo)記效果,。但有些較穩(wěn)定性抗原,，如HBsAg、HBcAg等在尸檢標(biāo)本中,，抗原顯示仍較好,。
組織標(biāo)本的取材常常受到各種因素的影響，如各種內(nèi)窺鏡鉗取的組織,，常因過(guò)度擠壓而變形,，嚴(yán)重者組織結(jié)構(gòu)被破壞。大組織標(biāo)本病變分布廣泛,，抗原在組織中分布不均一,，常出現(xiàn)人為的組織取材不準(zhǔn)確。為了避免上述缺點(diǎn),，組織取材時(shí)應(yīng)注意：①活檢鉗的刃口必須鋒利,，以免組織受擠壓；②取材部位必須是主要病變區(qū),；③必須取病灶與正常組織交界區(qū),；④必要時(shí)取遠(yuǎn)距病灶區(qū)的正常組織作對(duì)照。
為充分保存組織的抗原性,，標(biāo)本離體后慶立即作處理,，或立即速凍成凍塊進(jìn)行冰凍切片，或立即用固定液固定進(jìn)行脫水,、浸蠟,、包埋、石蠟切片,。如不能迅速制片,，可貯存于液氮罐內(nèi)或-70。C冰箱內(nèi)備用,。