問(wèn)題1：如何準(zhǔn)備透析膜管,？

透析膜管的準(zhǔn)備因膜管材質(zhì)和生產(chǎn)工藝的差別而有所不同,。注意，我們不推薦煮沸處理,，因其可能損壞膜管并改變膜孔徑,。

A.           生物技術(shù)級(jí)RC、CE及PVDF膜可以用DI水沖洗15-30分鐘,，去除防腐劑*,。

B.           Spectra/PorR7 標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜已經(jīng)預(yù)處理，去除了重金屬和硫化物,，只需在去離子水中浸泡15-30分鐘,，去除*即可。

C.           Spectra/PorR 1-6 標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜,，一般情況下,，在水中漂洗足以去除甘油或防腐劑，而對(duì)于親和研究之類極其敏感的透析應(yīng)用或者重金屬及硫化物會(huì)影響透析樣品下游分析的應(yīng)用,，可能需要一些額外的處理以去除在生產(chǎn)過(guò)程中引入的痕量水平重金屬及硫化物,，spectrumlabs提供Heavy Metal Cleaning Kit。

問(wèn)題2：透析的原理是什么,？一般需要多長(zhǎng)時(shí)間才能完成,？

透析是指溶質(zhì)在濃度梯度的驅(qū)使下，選擇性擴(kuò)散通過(guò)半透膜,，從而達(dá)到大/小分子分離,，膜兩側(cè)濃度平衡，即小顆粒的溶質(zhì)通過(guò)膜,，而大分子物質(zhì)不能通過(guò),，被截留在膜另一邊。

如果將樣品置于透析膜管內(nèi),，通過(guò)置換膜管外部的透析緩沖液,，可將小顆粒物質(zhì)清除，從而達(dá)到純化大分子物質(zhì)的目的,。一般來(lái)說(shuō)，一天之內(nèi)置換3-5次緩沖液,，然后在室溫條件下,，放在攪拌臺(tái)上隔夜透析，即可達(dá)到的透析結(jié)果,。標(biāo)準(zhǔn)的透析操作一般需要16-24小時(shí),。許多因素會(huì)影響透析效率,，包括：擴(kuò)散系數(shù)、pH值,、溫度,、時(shí)間、物質(zhì)濃度,、樣品體積,、透析緩沖液體積、透析緩沖液的置換次數(shù),、膜表面積,、膜厚度、分子帶電荷及緩沖液攪拌速率,。

問(wèn)題3：透析一個(gè)樣品需要多少體積的透析緩沖液,？緩沖液置換頻率怎么安排？

透析緩沖液的體積越大,，小分子擴(kuò)散的驅(qū)動(dòng)力越大,。我們一般推薦緩沖液和樣品的體積比為100:1，*為500：1,。當(dāng)擴(kuò)散速率降低,，膜兩側(cè)溶液趨于平衡時(shí)，通過(guò)置換緩沖液,，可維持小分子擴(kuò)散驅(qū)動(dòng)力和透析速率,。我們一般推薦在12-24小時(shí)內(nèi)，置換緩沖液2到3次,，具體安排如下：

*次緩沖液置換：透析開始后2-3小時(shí)

第二次緩沖液置換：透析開始后4-5小時(shí)

zui后一次緩沖液置換：透析隔夜之前

問(wèn)題4：如何選擇正確的截留分子量（MWCO）,？

截留分子量應(yīng)該竟可能的大，以使透析速率zui大化,。但是,，為了獲得zui大的樣品回收率，選擇的截留分子量應(yīng)至少為需純化的大分子物質(zhì)分子量的一半,。對(duì)于需對(duì)幾種分子進(jìn)行分離的應(yīng)用,，分子之間的分子量差至少為5倍，才能完成有效的膜透析,。若不能滿足分子量差的要求,，可能需要使用其它的分離技術(shù)，如色譜方法或切向流過(guò)濾,。

問(wèn)題5：哪種膜的蛋白質(zhì)結(jié)合率zui低,？

每種膜對(duì)不同的分子具有不同的親和性。對(duì)于球狀蛋白，相對(duì)的結(jié)合親和性由低到高為CE< RC

問(wèn)題6：怎樣為膜管選擇合適大小的膜夾,？

標(biāo)準(zhǔn)RC膜（Spectra/Por 1-7）和生物技術(shù)級(jí)RC膜由柔韌的再生纖維素聚合物制造,，可使用任何一種透析膜夾密封。生物技術(shù)級(jí)CE & PVDF膜由相對(duì)剛性的聚合物制造,，需要使用相對(duì)溫和的通用膜夾,。鑒于通用膜夾對(duì)于所有類型的膜管都能起到很好的密封作用，如不確定選擇哪種膜夾合適,，使用通用膜夾即可,。標(biāo)準(zhǔn)膜夾一般只用于標(biāo)準(zhǔn)級(jí)RC膜管。

膜夾的密封寬度一般需比膜管的扁平寬度長(zhǎng)4-10 mm,。通用膜夾的zui小密封寬度為50 mm,。對(duì)于所有扁平寬度規(guī)格的spectrumlabs生物技術(shù)級(jí)膜管，均有相應(yīng)的膜夾可供選擇,。

問(wèn)題7：透析膜的保存時(shí)間為多長(zhǎng),？

干包裝的透析膜可保存5年。濕包裝的透析膜（0.1% 的*溶液）保存期限為3年,。輻照滅菌的透析膜可保存1.5年,。

問(wèn)題8：透析膜變干或凍存之后是否仍可使用？

濕潤(rùn)的透析膜變干之后,，孔徑受到不可逆的影響,，膜變得脆弱易碎，容易泄露,，不推薦繼續(xù)使用,。

透析膜凍存之后，冰晶會(huì)使膜破裂,，導(dǎo)致泄露,，此時(shí)不推薦使用該膜。

問(wèn)題9：透析膜*不含內(nèi)毒素嗎,？

spectrumlabs確認(rèn)所有透析膜不含有內(nèi)毒素,，符合普通實(shí)驗(yàn)室使用規(guī)格要求。

問(wèn)題10：我需要擔(dān)心透析膜上的皺紋,、滾痕或折線嗎,？

只要膜是完整的，滾痕或者折線不會(huì)影響膜的擴(kuò)散特性,。

問(wèn)題11：CE膜比RC膜更具剛性,，且不透明嗎？

纖維素酯（CE）膜內(nèi)的聚合物交聯(lián)形成相對(duì)剛性的晶格,，而再生纖維素（RC）聚合物形成更加柔韌的網(wǎng)格結(jié)構(gòu),。不透明性是由網(wǎng)格中孔眼的大小所決定的,，孔眼越大，膜越不透明,。

問(wèn)題12：透析膜可以化學(xué)密封或熱密封嗎？

CE和RC透析膜只能機(jī)械密封,，但PVDF透析膜可以機(jī)械密封或熱密封,，通常用于樣品“封裝”目的。

問(wèn)題13：處理相同的蛋白樣品,，Spectra/PorR 透析膜可重復(fù)使用嗎,？

我們不推薦重復(fù)使用透析膜，因?yàn)樘囟ǖ奶幚聿僮骺赡軙?huì)對(duì)膜造成污染,，一定的透析條件（pH值,、溫度、化學(xué)接觸等）也會(huì)對(duì)膜的完整性造成損害,，和/或?qū)е滦孤?，特別是在打開和重新夾上膜夾時(shí)。

問(wèn)題14：膜孔徑有多,，什么是MWCO,？

透析膜微觀下呈海綿狀結(jié)構(gòu)，因此,，更適合通過(guò)評(píng)定其截留性能來(lái)間接地定義“孔徑”,，亦即“截留分子量”（Molecular Weight Cut Off，MWCO）,。MWCO定義為在17個(gè)小時(shí)內(nèi),，膜截留率為90%的溶質(zhì)分子量?；诖硕x,，選擇透析膜時(shí)，MWCO應(yīng)小于需要截留的分子的大小,。

問(wèn)題15：透析膜Spectra/PorR 2和4有什么區(qū)別,？

Spectra/PorR  2和4都有12-14 kD的截留分子量。Spectra/PorR 透析膜更適合溫和透析,，Spectra/PorR 2可提供特定的更大和更小的扁平寬度,，和/或滲透性；也就是說(shuō),，Spectra/PorR 2的水滲透性比Spectra/PorR 4更*,。

問(wèn)題16：關(guān)于膜表面積和樣品量之間的關(guān)系有沒(méi)有經(jīng)驗(yàn)法則？

表面積與體積的比值取決于膜管扁平寬度,。如果有兩段相同長(zhǎng)度的膜管,，扁平寬度較小的膜管具有較高的比表面積,，而扁平寬度較大的膜管比表面積相對(duì)較小，也就是說(shuō),，前者的透析速率更快,。原因是扁平寬度較小的膜管，溶質(zhì)的擴(kuò)散距離較短,，溶質(zhì)之間通過(guò)膜孔的競(jìng)爭(zhēng)也較小,。而扁平寬度大，亦即溶質(zhì)到達(dá)膜表面的距離也較長(zhǎng),，溶質(zhì)之間對(duì)膜孔的競(jìng)爭(zhēng)也較大,。一般而言，比表面積越大,，透析越快,。

問(wèn)題17：如果膜兩側(cè)的摩爾滲透壓濃度相等，但濃度梯度仍然存在,，物質(zhì)的通過(guò)效率如何,？

大多數(shù)透析結(jié)束時(shí)膜兩側(cè)滲透壓相同。透析過(guò)程是由膜管內(nèi)外兩側(cè)的濃度梯度驅(qū)動(dòng)的,。如果滲透壓力有很大的差別,，水會(huì)通過(guò)膜以平衡膜兩側(cè)的滲透壓。如果過(guò)多的水通過(guò)膜,，透析膜管可能會(huì)隨水運(yùn)動(dòng)的方向增大或縮小,，在體積增加到一定程度時(shí)，有可能導(dǎo)致膜夾松動(dòng)或膜管破裂,。

問(wèn)題18：進(jìn)行超濾時(shí),，透析膜能承受多大的壓力？

透析膜設(shè)計(jì)不適合用于壓力過(guò)濾,。在不影響截留分子量的前提下,，zui大推薦壓力為1.5 psi。

問(wèn)題19：一般推薦使用哪種透析液（緩沖液）,？

生物分子必須保存在嚴(yán)格的pH值控制條件下,，以穩(wěn)定其分子極性。典型的透析緩沖液pH范圍為6-8,。以下為常用的幾種可以作為緩沖液的生化溶液：

·                水

·                PBS

·                TBS

·                HEPES

·                氨基酸緩沖液

·                 

問(wèn)題20：為什么使用微米vs道爾頓（MW）單位,，怎么轉(zhuǎn)換？

溶解的分子大小以分子量來(lái)定義,，單位為道爾頓,，而顆粒和細(xì)胞大小常以直徑來(lái)定義，由于分子的結(jié)構(gòu)和形態(tài)不同,，相同分子量的物質(zhì),，分子大小和形態(tài)可能相差較大,，兩者之間沒(méi)有的對(duì)應(yīng)關(guān)系。出于這個(gè)原因,，許多常見的生物材料都已特別定性,，并將大約的尺寸標(biāo)注在轉(zhuǎn)換表上作為估算的參考，以用于透析,、超濾和微濾應(yīng)用,。道爾頓與微米單位之間的轉(zhuǎn)化，請(qǐng)參考spectrumlabs,。

問(wèn)題21：對(duì)于鹽濃度較高的樣品，*的透析方法是什么,？

如果可能,，我們推薦使用低鹽濃度的緩沖液。不推薦直接使用純DI水作為緩沖液,，因?yàn)闈B透壓力可能將水引入膜管,，使樣品體積膨脹并可能導(dǎo)致膜管破裂。使用一系列濃度逐漸降低的溶液作為緩沖液可防止?jié)B透壓力導(dǎo)致的膜管膨脹,。每次緩沖液置換,，可將溶質(zhì)濃度降低十分之一，也就是說(shuō),，透析一個(gè)5M NaCl的樣品,，可使用500 mM NaCl的緩沖液。

問(wèn)題22：可以使用繩子結(jié)扎膜管,，而不使用膜夾嗎,？

我們不推薦使用繩子結(jié)扎膜管。因?yàn)槔K結(jié)對(duì)膜管的損害具有很大的不確定性,，并且可能不能提供有效的密封,，而導(dǎo)致泄露。只有膜夾才能提供足夠的密封性,，從而保護(hù)樣品,。

問(wèn)題23：透析膜管應(yīng)該剪多長(zhǎng)？

對(duì)于每種膜管扁平寬度,，spectrumlabs提供相關(guān)的容積/長(zhǎng)度比,，可方便計(jì)算透析樣品所需的膜管長(zhǎng)度。如果扁平寬度為16 mm,，容積/長(zhǎng)度比為0.79 ml/cm,，要容納5 ml的樣品，則需要大約6.5 cm長(zhǎng)的膜管,。但是,，為保持樣品漂浮,，一般需要在頂部空間預(yù)留10-20%膜長(zhǎng)（約為1 cm）。此外,，也需在兩端為膜夾各預(yù)留2 cm,。所以總的膜管長(zhǎng)度應(yīng)至少為11.5 cm。

可根據(jù)以下公式計(jì)算膜管長(zhǎng)度：

總長(zhǎng)度=（樣品體積）/（容積/長(zhǎng)度）+（額外的10-20%）+4 cm