當(dāng)顆粒性抗原 ( 病原微生物或紅細(xì)胞 ) 與相應(yīng)抗體持異性結(jié)合,在電解質(zhì)存在下兩者比例適當(dāng)時(shí),,可形成肉眼可見的凝集塊,,此種現(xiàn)象稱為凝集反應(yīng)( agglutinogen) 。細(xì)菌,、螺旋體和紅細(xì)胞等顆粒性抗原,,在適當(dāng)電解質(zhì)參與下可直接與相應(yīng)抗體結(jié)合形成肉眼可見的凝集塊,,稱為直接凝集反應(yīng),。常用的直接凝集試驗(yàn)有玻片法和試管法兩種,。
本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行玻片凝集反應(yīng)實(shí)驗(yàn)。
一,、細(xì)菌鑒定
玻片凝集反應(yīng) (slide agglutination) 是將已知的抗體直接與未知的顆粒性抗原物質(zhì)( 如細(xì)菌,、立克次體、鉤端螺旋體等 ) 混合,,在有適當(dāng)電解質(zhì)存在的條件下,,如兩者對(duì)應(yīng)便發(fā)生持異性結(jié)合而形成肉眼可見的凝集物,即為陽性,;如兩者不對(duì)應(yīng)便無凝集物出現(xiàn),,即為陰性。此法屬定性試驗(yàn),,主要用于細(xì)菌鑒定和分型等,。
【材料】
1 .抗原,大腸桿菌( E.coli ) 18 — 24h 培養(yǎng)物,;
抗體,, 1 : 10 兔抗大腸桿菌血清。
2. 生理鹽水,。
3. 潔凈載玻片,、記號(hào)筆、吸管 ( 帶乳膠吸頭 ) ,。
【方法】
1.取載玻片一張平置實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,,用記號(hào)筆劃分為 2 格,并標(biāo)明 1 ,、 2 ,。
2.用 1m 1 吸管吸取生理鹽水 1 — 2 滴于破片第 1 格內(nèi),另取一支吸管,,吸取 1 : 10 兔抗大腸桿菌血清 1 — 2 滴于第 2 格內(nèi),。
3.將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒灼滅菌,冷卻后取少許大腸桿菌培養(yǎng)物與第 1 格內(nèi)的生理鹽水混合,,并涂抹成均勻懸液,。然后用同樣方法烷灼接種環(huán),待冷卻后取少許大腸桿菌培養(yǎng)物與第 2 格內(nèi)的兔抗大腸桿菌血清混合并涂抹成均勻懸液,。靜置數(shù)分鐘后觀察結(jié)果,。
【結(jié)果觀察】
如上述混合懸液由均勻混濁狀變?yōu)槌吻逋该鳎⒊霈F(xiàn)大小不等的乳白色凝集塊者即為陽性(+),;如混合物仍呈均勻混濁狀則為陰性(-),。如肉眼觀察不夠清楚,,可將玻片置于顯微鏡下用低倍鏡觀察。
本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果第 1 格內(nèi)不出現(xiàn)凝集塊,,反應(yīng)為陰性,。
【注意事項(xiàng)】
取細(xì)菌培養(yǎng)物時(shí),不宜過多,,與抗血清混合涂抹時(shí),,必須將細(xì)菌涂散,涂均勻,,但不宜涂得太寬,,以免很快干涸而影響結(jié)果觀察。
二 . 人類 ABO 血型鑒定試驗(yàn)
人類 AB() 血型抗原有 A 和 B 兩種,。 A 型紅細(xì)胞膜上有 A 抗原,, B 型紅細(xì)胞上有 B 抗原, AB 型有 A 和 B 兩種抗原,,而 O 型則不含有 A 和 B 抗原,。抗 A ,、抗 B 分型試劑是分別針對(duì) A 抗原或 B 抗原的特異性抗體,。當(dāng)將已知的抗 A 或抗 B 試劑與受檢者紅細(xì)胞混合時(shí),抗 A 和/或抗 B 血清與紅細(xì)胞表面上的相應(yīng)抗原結(jié)合而引起紅細(xì)胞凝集,,根據(jù)其凝集狀況便可判定受試者的血型,。
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