操作步驟：

提示：

（1） *次使用前請先在漂洗液RW瓶加入量無水乙醇!

（2） 操作前在裂解液RLT中加入β-巰基乙醇至終濃度1%，如1 ml RLT 中加入10μl β-巰基乙醇。此裂解液現(xiàn)用現(xiàn)配,。配好的RLT 4℃可放置一個月。

1. 直接研磨法（推薦）:

a.  新鮮植物組織稱重后取100mg迅速剪成小塊放入研缽（冰凍保存或者液氮保存樣品可直接稱重后取100mg放入研缽）,， 加入10體積（1ml）RLT（請確定已加入β-巰基乙醇）和1體積（100μl） PLANTaid 室溫下充分研磨成勻漿,，注意應(yīng)該迅速研磨讓組織和裂解液RLT立刻充分接觸以抑制RNA酶活性,。

b.  將裂解物轉(zhuǎn)入離心管,，劇烈搖晃振蕩15秒,，13，000rpm離心5-10分鐘,沉淀不能裂解的碎片和結(jié)合有多糖多酚的PLANTaid,，取450μl裂解物上清轉(zhuǎn)到一個新離心管。

c.  加入上清體積一半的無水乙醇（0.5體積）,，此時可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心,。

d.  立刻接操作步驟項下3。

2. 液氮研磨法:

a.  取500μl裂解液RLT（已經(jīng)加入β-巰基乙醇）,，轉(zhuǎn)入1.5ml離心管中,，加入50μl PLANTaid混勻備用。

b.  液氮中研磨適量植物組織成細粉后,，取50mg細粉轉(zhuǎn)入上述裝有RLT和PLANTaid的離心管, 立即用手劇烈振蕩20秒,，充分裂解。

在56℃溫育1-3分鐘有助于裂解植物,但是淀粉含量高的植物不能溫育,因為提高的溫度可能導致淀粉膨脹,。

c.  用帶鈍針頭的一次性 1 ml（配0.9mm針頭） 注射器抽打裂解物 10 次或直到得到滿意勻漿結(jié)果（或者電動勻漿30秒）,可以剪切DNA,降低粘稠度和提高產(chǎn)量,。

d.  將裂解物13，000rpm離心5-10分鐘,沉淀不能裂解的碎片和結(jié)合有多糖多酚的PLANTaid, 將所有裂解物上清轉(zhuǎn)到一個新離心管,。

e.  較估計裂解物（上清）體積,加入0.5體積的無水乙醇,此時可能出現(xiàn)沉淀,但是不影響提取過程,立即吹打混勻,不要離心,。

f.  立刻接操作步驟項下3。

3. 將混合物（每次小于700μl,多可以分兩次加入）加入一個吸附柱RA中,，（吸附柱放入收集管中）13,000 rpm離心60秒,，棄掉廢液。

4. 加700μl 去蛋白液RW1,，室溫放置30秒,，12，000rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。

如果DNA殘留明顯,可在加入RW1后室溫放置5分鐘后再離心。

5. 加入500μl漂洗液RW（請先檢查是否已加入無水乙醇!）,，12,000 rpm 離心30秒,，棄掉廢液,。加入500μl漂洗液RW,重復一遍。

6. 將吸附柱RA放回空收集管中,，13,000 rpm離心2分鐘,，盡量除去漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。

7. 取出吸附柱RA,，放入一個RNase free離心管中,，根據(jù)預(yù)期RNA產(chǎn)量在吸附膜的中間部位加30-50μl RNase free water（事先在 70-90℃水浴中加熱效果更好）， 室溫放置1分鐘,，12,000 rpm 離心1分鐘,。

8. 如果預(yù)期RNA產(chǎn)量>30μg,加30-50μl RNase free water重復步驟7, 合并兩次洗脫液,或者使用*次的洗脫液加回到吸附柱重復步驟一遍（如果需要RNA濃度高）。

洗脫兩遍的RNA洗脫液濃度高,分兩次洗脫合并洗脫液的RNA產(chǎn)量比前者高15–30%,但是濃度要低,用戶根據(jù)需要選擇,。