一、基本原理
　　霉菌菌絲較粗大,，細(xì)胞易收縮變形,，而且孢子很容易飛散，所以制標(biāo)本時(shí)常用乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液。此染色液制成的霉菌標(biāo)本片其特點(diǎn)是：（a）細(xì)胞不變形,；（b）具有殺菌防腐作用,，且不易干燥，能保持較長(zhǎng)時(shí)間,；（c）溶液本身呈藍(lán)色,，有一定染色效果。
　　霉菌自然生長(zhǎng)狀態(tài)下的形態(tài),，常用載玻片觀察,，此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察,。此外,，為了得到清晰、完整,、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察,。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長(zhǎng)在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上,，然后將長(zhǎng)菌的玻璃紙剪取一小片,，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。
二,、器材
　　曲霉（Aspergillussp．）,，青霉（Penicillium sp．），根霉（Rhizopus sp．）,，毛霉（Mucor sp．）,；
　　乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，20％甘油,，查氏培養(yǎng)基平板,，馬鈴薯培養(yǎng)基；無菌吸管,，載玻片，蓋玻片,，U形棒,，解剖刀，玻璃紙,，濾紙等,。
三、操作步驟
　　1．一般觀察法
　　于潔凈載玻片上,，滴一滴乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液,，用解剖針從霉菌菌落的邊緣處取小量帶有孢子的菌絲置染色液中，再細(xì)心地將菌絲挑散開,，然后小心地蓋上蓋玻片,，注意不要產(chǎn)生氣泡。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察,，必要時(shí)再換高倍鏡,。
　　2．載玻片觀察法
　　（1）將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi),，再放上U形玻棒,，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個(gè)蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端,，蓋上皿蓋,，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好,，用1．05kg/cm2,，121．3℃滅菌20分鐘或干熱滅菌，備用,。
　?。?）將6—7ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后,，用無菌解剖刀切成0．5—1cm2的瓊脂塊,，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊,。
　?。?）用滅菌的尖細(xì)接種針或裝有柄的縫衣針，?。ㄈ庋鄯侥芸匆姷模┮稽c(diǎn)霉菌孢子,，輕輕點(diǎn)在瓊脂塊的邊緣上，用無菌鑷子夾著立在載玻片旁的蓋玻片蓋在瓊脂塊上,，再蓋上皿蓋,。
　　（4）在培養(yǎng)皿的濾紙上,，加無菌的20％甘油數(shù)毫升,，至濾紙濕潤(rùn)即可停加。將培養(yǎng)皿置28℃培養(yǎng)一定時(shí)間后,，取出載玻片置顯微鏡下觀察,。
　　3．玻璃紙透析培養(yǎng)觀察法
　　（1）向霉菌斜面試管中加入5ml無菌水,，洗下孢子,，制成孢子懸液。
　　（2）用無菌鑷子將已滅菌的,、直徑與培養(yǎng)皿相同的圓形玻璃紙覆蓋于查氏培養(yǎng)基平板上,。
　　（3）用1ml無菌吸管吸取0．2ml孢子懸液于上述玻璃紙平板上,，并用無菌玻璃刮棒涂抹均勻,。
　　（4）置28℃溫室培養(yǎng)48小時(shí)后,，取出培養(yǎng)皿,，打開皿蓋，用鑷子將玻璃紙與培養(yǎng)基分開,，再用剪刀剪取一小片玻璃紙置載玻片上,，用顯微鏡觀察。
四,、實(shí)驗(yàn)報(bào)告