一,、基本原理
微生物細胞大小,是微生物的形態(tài)特征之一,,也是分類鑒定的依據(jù)之一,。由于菌體很小,,只能在顯微鏡下測量。用來測量微生物細胞大小的工具有目鏡測微尺(圖Ⅳ-4)和鏡臺測微尺(圖Ⅳ-5),。
鏡臺測微尺(圖Ⅳ-5)是*部分刻有等分線的載玻片,。一般將1mm等分為100格(或2mm等分為200格),每格長度等于0.01mm(即106μm),。是于校正目鏡測微尺每格長度的,。
目鏡測微尺(圖Ⅳ-4,A)是一塊可放在接目鏡內(nèi)的隔板上的圓形小玻片,,其*刻有的刻度,,有等分50小格或100小格兩種,每5小格間有一長線相隔,。由于所用接目鏡放大倍數(shù)和接物鏡放大倍數(shù)的不同,,目鏡測微尺每小格所代表的實際長度也就不同,因此,,目鏡測微尺不能直接用來測量微生物的大小,,在使用前必須用鏡臺測微尺進行校正,以求得在一定放大倍數(shù)的接目鏡和接物鏡下該目鏡測微尺每小格的相對值,,然后才可用來測量微生物的大小,。
二、器材
枯草芽孢桿菌染色玻片標本,,目鏡測微尺,,鏡臺測微尺,顯微鏡,,擦鏡紙,,香柏油等。
三,、操作步驟
1.目鏡測微尺的標定
(1)放置目鏡測微尺取出接目鏡,,旋開接目鏡透鏡,將目鏡測微尺的刻度朝下放在接目鏡筒內(nèi)的隔板上(圖Ⅳ-4,,B),,然后旋上接目透鏡,,zui后將此接目鏡插入鏡筒內(nèi)(圖Ⅳ-4,,C)。
?。?)放置鏡臺測微尺將鏡臺測微尺置于顯微鏡的載物臺上,,使刻度面朝上,。
?。?)校正目鏡測微尺先用低倍鏡觀察,,對準焦距,,當看清鏡臺測微尺后,轉(zhuǎn)動接目鏡,,使目鏡測微尺的刻度與鏡臺測微尺的刻度平行,,移動推動器,,使目鏡測微尺和鏡臺測微尺的某一區(qū)間的兩對刻度線*重合,,然后計數(shù)出兩對重合線之間各自所占的格數(shù)(圖Ⅳ-6),。
根據(jù)計數(shù)得到的目鏡測微尺和鏡臺測微尺重合線之間各自所占的格數(shù),,通過如下公式換算出目鏡測微尺每小格所代表的實際長度,。
目鏡測微尺每小格長度(μm)=
同法校正在高倍鏡和油鏡下目鏡測微尺每小格所代表的長度。
2.菌體大小的測定
目鏡測微尺校正后,,移去鏡臺測微尺,,換上枯草芽孢桿菌染色玻片標本,校正焦距使菌體清晰,,轉(zhuǎn)動目鏡測微尺(或轉(zhuǎn)動染色標本),測出枯草芽孢桿菌的長和寬各占幾小格,,將測得的格數(shù)乘以目鏡測微尺每小格所代表的長度,,即可換算出此單個菌體的大小值,在同一涂片上需測定10至20個菌體,,求出其平均值,,才能代表該菌的大小。而且一般是用對數(shù)生長期的菌體來進行測定,。
3.取出目鏡測微尺,,將接目鏡放回鏡筒,再將目鏡測微尺和鏡臺測微尺分別用擦鏡紙擦拭后,,放回盒內(nèi)保存,。
四、實驗報告
(1)將目鏡測微尺校正結(jié)果填入下表,。
(2)在高倍鏡下測量枯草芽孢桿菌大小結(jié)果填入下表,。
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