各種His.Bind基質(zhì)的產(chǎn)品如何選擇:本文介紹帶Ni NTA瓊脂糖,、無(wú)Ni IDA瓊 脂糖、帶Ni的IDA瓊脂糖預(yù)裝柱,、無(wú)Ni IDA觸須甲?;i的IDA纖維素預(yù)裝筒,、帶Ni的IDA磁性瓊脂糖……等His.Bind基質(zhì)的特點(diǎn)和應(yīng)用,。
His.Bind基質(zhì)選擇指南:與任何純化介質(zhì)一樣,,His.Bind樹(shù)脂在接近結(jié)合載量時(shí)使用,可獲得zui干凈的分離效果
產(chǎn)品 | 類型 | 載量 | 特點(diǎn) | 應(yīng)用 |
Ni-NTA His.Bind 樹(shù)脂 | 帶Ni NTA瓊脂糖 | 5-10 mg/ml | zui小的Ni2+浸出與20mM b-ME相容 | 小到中量,,重力流柱推薦用于真核抽提物 |
Ni-NTA His.Bind Superflow | 帶Ni NTA瓊脂糖 | 5-10 mg/ml | zui小的Ni2+浸出與20mM b-ME相容高流速和壓力 | 小量到生產(chǎn)級(jí)FPLC或重力流柱推薦用于真核抽提物 |
His.Bind樹(shù)脂 | 無(wú)Ni IDA瓊 脂糖 | 8 mg/ml | 可重復(fù)使用多次與His.Bind緩沖試劑盒兼容 | 小到中量重力流柱或批次模式 |
His.Bind柱(Cloumn) | 帶Ni的IDA瓊脂糖預(yù)裝柱 | 10 mg/次 | 預(yù)裝柱與His.Bind Quick緩沖試劑盒兼容 | 方便的純化重力流柱 |
His .Bind Fractogel(S) | 無(wú)Ni IDA觸須甲?;?/span> | >10 mg/ml | 20-40mM顆粒大小高流速和壓力 | 小量到生產(chǎn)級(jí)FPLC或重力流柱高分辨率分離 |
His.Bind Fractogel(M) | 無(wú)Ni IDA觸須甲酰化 | >10 mg/ml | 40-90mM顆粒大高流速和壓力小 | 小量到生產(chǎn)級(jí)FPLC或重力流柱 |
His.Bind Quick 300筒( Ca rtridge) | 帶Ni的IDA纖維素預(yù)裝筒 | 0.5 mg/次 | 每端鎖緊接口與His.Bind Quick緩沖試劑盒配合使 用 | 注射器操作真空多支管操作快速純化 |
His.Bind Quick 900 筒(Cartridge) | 帶Ni的IDA纖維素預(yù)裝筒 | 2 mg/次 | 每端鎖緊接口 與His.Bind Quick緩沖試劑盒配合使用 | 注射器操作 |
His.Bind Quick 柱(Cloumn) | 帶Ni的IDA纖維素預(yù)裝柱 | 5 mg/次 | 每端鎖緊接口與His.Bind Quick緩沖試劑盒配合使用 | 真空多支管操作快速純化多個(gè)樣品 |
His.Bind 磁化瓊脂糖珠 | 帶Ni的IDA磁性瓊脂糖 | 5 mg/ml | 3m磁性瓊脂糖珠 | 快速小量純化磁性分離適合高通量操作 |
His.Bind柱
His.Bind柱預(yù)裝了1.25ml柱床體積的Ni2+結(jié)合His.Bind樹(shù)脂,。頂部和底部的玻璃纖維確保上樣和走柱時(shí)緩沖液均勻流動(dòng)和zui小干擾,。使用BugBuster和Benzonase?核酸酶制備細(xì)菌裂解物可獲得較好效果。
His.Bind和His.Bind快速緩沖液試劑盒
His.Bind緩沖液試劑盒是一套經(jīng)過(guò)測(cè)試和優(yōu)化的緩沖液,,用于IDA His.Bind樹(shù)脂一步法純化蛋白,。包括的溶液可用于10根2.5ml柱的Ni2+結(jié)合、洗滌和洗脫,。除了8X Ni2+結(jié)合緩沖液(樹(shù)脂以Ni2+結(jié)合形式提供),,His.Bind快速緩沖液試劑盒與His.Bind緩沖液試劑盒成分*一樣。
Ni-NTA緩沖液試劑盒
Ni-NTA緩沖液試劑盒提供的一套緩沖液優(yōu)化用于在Ni-NTA His.Bind樹(shù)脂上純化His.Tag融合蛋白,。這些磷酸緩沖液與His.Bind緩沖液試劑盒中的Tris溶液不同,。用戶可以參考操作指南,使用4X濃縮液進(jìn)行結(jié)合,、洗滌和洗脫操作,。
BugBusterTM Ni-NTA His.Bind和His.Bind純化試劑盒
BugBuster蛋白抽提試劑是從大腸桿菌有效抽提可溶性蛋白的即用型溶液(不需要機(jī)械破碎細(xì)菌)。BugBuster Ni-NTA His.Bind和His.Bind純化試劑盒帶有BugBuster試劑(方便制備可溶性細(xì)胞抽提物)以及His.Tag融合蛋白親和純化的相應(yīng)樹(shù)脂,。兩個(gè)試劑盒都包括Benzonase核酸酶,,用于降低粘度并從蛋白制備物中去除核酸。BugBuster His.Bind純化試劑盒還包括層析緩沖液,。
His.Tag/His.Bind技術(shù)可用于純化His.Tag序列中的組氨酸與固定化金屬離子(通常為Ni2+),。zui常用的金屬螯合物包括NTA和IDA,在實(shí)際應(yīng)用中,,這兩種螯合物各有利弊,,因此要優(yōu)化條件,盡量減少非特異結(jié)合蛋白的共純化才能達(dá)到*實(shí)驗(yàn)結(jié)果,。
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