一,、基本原理
　　利用血球計(jì)數(shù)板在顯微鏡下直接計(jì)數(shù),，是一種常用的微生物計(jì)數(shù)方法,。此法的優(yōu)點(diǎn)是直觀,、快速,。將經(jīng)過(guò)適當(dāng)稀釋的菌懸液（或孢子懸液）放在血球計(jì)數(shù)板載玻片與蓋玻片之間的計(jì)數(shù)室中,，在顯微鏡下進(jìn)行計(jì)數(shù),。由于計(jì)數(shù)室的容積是一定的（ 0．1mm2）,，所以可以根據(jù)在顯微鏡下觀察到的微生物數(shù)目來(lái)?yè)Q算成單位體積內(nèi)的微生物總數(shù)目,。由于此法計(jì)得的是活菌體和死菌體的總和，故又稱為總菌計(jì)數(shù)法,。
　　血球計(jì)數(shù)板,，通常是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺(tái),。中間的平臺(tái)又被一短橫槽隔成兩半,，每一邊的平臺(tái)上各刻有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分九個(gè)大方格,，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室,，微生物的計(jì)數(shù)就在計(jì)數(shù)室中進(jìn)行。血球計(jì)數(shù)板構(gòu)造如圖Ⅷ-1,。
　　計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格,，一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格（圖Ⅷ-2）,；另一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格,，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格（圖Ⅷ-1,，C）。但無(wú)論是哪種規(guī)格的計(jì)數(shù)板,，每一個(gè)大方格中的小方格數(shù)都是相同的,，即16×25=400小方格，如圖Ⅷ-2,。
　　每一個(gè)大方格邊長(zhǎng)為1mm,，則每一大方格的面積為1mm2，蓋上蓋玻片后,，載玻片與蓋玻片之間的高度為0．1mm,，所以計(jì)數(shù)室的容積為0．1mm3。
　　在計(jì)數(shù)時(shí),，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù),，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上16或25,，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù),，然后再換算成1ml菌液中的總菌數(shù)。
　　下面以一個(gè)大方格有25個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板為例進(jìn)行計(jì)算：設(shè)五個(gè)中方格中總菌數(shù)為A,，菌液稀釋倍數(shù)為B,，那么，一個(gè)大方格中的總菌數(shù)
　　因1ml=1cm3=1000mm3,，
（即0.1mm3中的細(xì)菌總數(shù)）=A*B*25/5
故1ml菌液中的總細(xì)菌數(shù)=A*25*10*1000*B/5　　
　 　　　　　　　　　　=50000A·B（個(gè)）
二,、器材
　　釀酒酵母菌懸液，血球計(jì)數(shù)板,，顯微鏡,，蓋玻片，無(wú)菌毛細(xì)管,。
三,、操作步驟
　　1．稀釋
　　將釀酒酵母菌懸液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，菌液如不濃,，可不必稀釋,。
　　2．鏡檢計(jì)數(shù)室
　　在加樣前，先對(duì)計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢,。若有污物,，則需清洗后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。
　　3．加樣品
　　將清潔干燥的血球計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片,，再用無(wú)菌的細(xì)口滴管將稀釋的釀酒酵母菌液由蓋玻片邊緣滴一小滴（不宜過(guò)多）,，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自行進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液,。注意不可有氣泡產(chǎn)生,。
　　4．顯微鏡計(jì)數(shù)
　　靜止5分鐘后,，將血球計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺(tái)上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置,，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù),。在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù),。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5—10個(gè)菌體為宜。每個(gè)計(jì)數(shù)室選5個(gè)中格（可選4個(gè)角和*的中格）中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù),。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的,。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí),，即作兩個(gè)菌體計(jì)數(shù),。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的值來(lái)計(jì)算樣品的含菌量。
　　5．清洗血球計(jì)數(shù)板
　　使用完畢后,，將血球計(jì)數(shù)板在水籠頭上用水柱沖洗,，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干,。鏡檢,，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。若不干凈,，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止,。
四、實(shí)驗(yàn)報(bào)告