1)收集10ml全血,,加入不含防腐劑的肝素(0.2ml肝素/10ml全血),。實驗全過程保持無菌操作。
2)在15ml離心管中的肝素化血中加入1ml 6%葡萄糖,,室溫放置20~30min,,沉降紅細胞。沉降時間不宜過長,,否則單核細胞將不再保留在富含白細胞的血漿,。
3)從葡聚糖處理的血中小心收集紅細胞上層的富含白細胞的血漿。
4)富含白細胞的血漿室溫300g離心8min,,沉淀細胞,。
5)棄上清,細胞輕懸于1ml PBS中,。
PBS(Dulbecco)
0.10g/L 無水CaCl2
0.20g/L KCl
0.20g/L KHPO4
0.10g/L MgCl2.6H2O
8.00g/L NaCl
2.16g/L NaH2PO4.7H2O
調(diào)pH至7.4
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