離心是一重要的樣品分離,、分析技術(shù),在醫(yī)學實驗室乃至相關(guān)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用,。
1 離心技術(shù)及離心機分類
離心是在離心力的作用下,,利用被離心樣品物質(zhì)的沉降系數(shù),、浮力、密度的差別,,進行分離,、濃縮、提取制備樣品以及分析測定生物大分子分子量和純度,。按其工作方式可分為離心過濾,、離心沉降(或澄清)及離心分離。
離心機的設(shè)計原理是利用驅(qū)動轉(zhuǎn)頭旋轉(zhuǎn)時所產(chǎn)生的離心場力加快樣品粒子的沉降速度,,把樣品中不同沉降系數(shù)或浮力密度差的物質(zhì)分離開,。決定離心力大小的因素除轉(zhuǎn)速(Revolved per minute,r/min)和離心(轉(zhuǎn)頭)半徑外,,還與粒子在旋轉(zhuǎn)運動中所受到的力(重力,、浮力、摩擦力)之作用影響有關(guān),,離心力方向與重力呈垂直,,故常用相對離心力(Relative centrifugal force,rcO表示,,即相對于重力作用在旋轉(zhuǎn)粒子上的離心力,,用重力加速度g(980cm/s )作為量值,也稱為“g-Force”,,表達式為:RCF=o)~/980,。
離心技術(shù)的關(guān)鍵是如何根據(jù)樣品粒子和介質(zhì)的性質(zhì)以及轉(zhuǎn)子的技術(shù)參數(shù)來確定離心力、轉(zhuǎn)速和離心時間設(shè)置,。粒子(細胞,、細胞器及大分子的統(tǒng)稱)的沉降或分離速率取決于離心力、粒子的大小,、形狀和密度以及沉降介質(zhì)的密度和粘度,。
根據(jù)用途,、轉(zhuǎn)速、功能配置可將醫(yī)學實驗室常用離心機幾大類型,,不同轉(zhuǎn)速的離心機產(chǎn)生不同的離心力,,具有不同的用途。
低速機型設(shè)計有較大容量(Large capacity centrifuge,,≥12L),,主要用于細胞、血清,、血漿以及批量樣品的分離制備,,另在生物制藥領(lǐng)域發(fā)揮著較大作用;高速離心機(High speed cen—trifuge)主要用于某些亞細胞器結(jié)構(gòu),、核酸,、蛋白質(zhì),、質(zhì)粒,、細菌的分離和制備;而超速離心機(Ultracentrifuge).~0適應(yīng)于病毒,、核酸及蛋白質(zhì)的分離純化,,進一步的分析研究還可采用分析型超速離心機。
近年來,,有一種稱之為“通用實驗室離心機(Universal lab—oratory centrifuge)”的機型進入醫(yī)學實驗室,,在性能上順應(yīng)了分子生物學、細胞生物學等相關(guān)領(lǐng)域?qū)嶒灱夹g(shù)的需要,,倍受實驗室工作者的關(guān)注,。其特點是兼顧了低速機和高速機、微量和較大容量的性能,,但體積小,、重量輕、耗電小,、操作簡便,;常見機型zui高轉(zhuǎn)速≥13 O00r/min,個別機型超過20O00r/min,,起始轉(zhuǎn)速可低到100r/min,;zui大rcf一般可達20000~g以上,個別機型達到60000xg,;離心容量zui大可達3 000ml,。本文重點討論此類機型。
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