1,、載玻片的處理：

抗原修復(fù)過程中，由于高溫,、高壓,、輻射等諸多因素的影響，極易造成脫片,。為保證試驗的正常進行,，可選用我公司提供的ZLI-9001 APES、ZLI-9003 HistogripTM或ZLI-9005 Poly-L-Lysine等幾種試劑,，對已清洗的載玻片進行處理,。具體方法如下： 1.1 APES：現(xiàn)用現(xiàn)配。將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的APES中,，停留20~30秒鐘,，取出稍停片刻，再入純丙酮溶液或蒸餾水中涮去未結(jié)合的APES,，置通風(fēng)櫥中晾干即可,。用此載玻片撈片時應(yīng)注意組織要一步到位，并盡量減少氣泡的存在,，以免影響染色結(jié)果,。 1.2 HistogripTM：將洗凈的玻片放入以1:50比例丙酮稀釋的Histogrip液中，停留1~2分鐘,，然后用雙蒸水快速清洗三次,，室溫干燥或60oC烤箱烘烤一小時，裝盒備用,。 1.3 Poly-L-Lysine：將洗凈,、干燥的載玻片放入以1:10比例去離子水稀釋的多聚賴氨酸溶液中，浸泡5分鐘,，60oC烤箱烘烤一小時或室溫干燥,。裝盒備用。試驗中使用的器具均為非玻璃制品,。

2,、常用酶消化：

2.1 胰蛋白酶：一般使用濃度為0.05%~0.1%，消化時間為37℃,、10~40分鐘,，主要用于細胞內(nèi)抗原的顯示。 2.2 胃蛋白酶：一般使用濃度為0.4%,，消化時間為37℃,、30~180分鐘,，主要用于細胞間質(zhì)抗原的顯示，如：Laminin（層粘蛋白）,，Collagen IV（IV型膠原）等,。 2.3 皂素（Saponin）：一般使用濃度為2~10?g/ml的saponin溶液，消化時間為室溫孵育30分鐘,。

3,、抗原熱修復(fù)：

可根據(jù)實驗室的具體條件，選用微波爐抗原修復(fù),、高壓鍋抗原修復(fù)或水浴高溫抗原修復(fù),。抗原熱修復(fù)可選用各種緩沖液,，如TBS,、PBS、重金屬鹽溶液等,，但實驗證明,，以0.01M枸櫞酸鹽緩沖液（pH6.0）效果。請選用我公司提供的ZLI-9064 枸櫞酸鹽緩沖液（粉劑）配制,，取該粉劑一包溶于1000ml的蒸餾水中，混勻,，其pH值在6.0 ± 0.1,，如因蒸餾水本身造成的pH值偏差，請自行調(diào)整,。

3.1 石蠟切片微波爐抗原修復(fù)操作方法：切片脫蠟至水后,，3％H2O2處理10分鐘，蒸餾水洗2分鐘×3,。將切片放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中,，置微波爐內(nèi)加熱使容器內(nèi)液體溫度保持在92℃~98℃之間并持續(xù)10~15分鐘（注意：無論是使用醫(yī)用或家用微波爐，請根據(jù)具體機型酌情設(shè)置條件,，務(wù)必滿足以上步驟中對溫度和時間的要求）,。取出容器，室溫冷卻10~20分鐘（注意：不可將切片從緩沖液中取出冷卻,，以便使蛋白能夠恢復(fù)原有的空間構(gòu)型）,。PBS洗，下接免疫組化染色步驟,。3.2 石蠟切片高壓抗原修復(fù)操作方法：切片脫蠟至水,。將1500ml~3000ml的枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）注入不銹鋼壓力鍋中加熱至沸騰。切片置于金屬架上,，放入鍋內(nèi),，使切片位于液面以下,，蓋鍋壓閥。當(dāng)壓力鍋開始慢慢噴氣時（約加熱5~6分鐘后）,，計時1~2分鐘,，然后將壓力鍋端離熱源，冷水沖至室溫后,，取下氣閥,，打開鍋蓋，取出切片,，蒸餾水洗后,，PBS洗2分鐘×3，下接免疫組化染色步驟,。

3.3 石蠟切片電爐煮沸抗原修復(fù)操作方法：切片脫蠟至水后,，放入盛有枸櫞酸鹽緩沖液（工作液）的容器中，并將此容器置于盛有一定數(shù)量自來水的大器皿中,，電爐上加熱煮沸,，從小容器的溫度到達92℃~98℃起開始計時15~20分鐘，然后端離電爐,，室溫冷卻20~30分鐘,，蒸餾水沖洗，PBS洗,，下接免疫組化染色步驟,。