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Bio-Rad推出基于QX100微滴式數(shù)字PCR平臺的Illumina TruSeq測序文庫ddPCR定量試劑盒
Bio-Rad推出基于QX100微滴式數(shù)字PCR平臺的Illumina TruSeq測序文庫ddPCR定量試劑盒
2013年Bio-Rad推出基于QX100TM微滴式數(shù)字PCRTM平臺的Illumina TruSeq測序文庫定量試劑盒，用于檢測測序文庫質(zhì)量和拷貝數(shù)，實(shí)現(xiàn)真正對測序文庫的全質(zhì)量控制,。
二代測序（NGS）又叫高通量測序,，是測序技術(shù)革命性的進(jìn)步，能一次上百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定,，使得對一個物種的轉(zhuǎn)錄組和全基因組進(jìn)行細(xì)致全貌的分析成為現(xiàn)實(shí),。如今NGS在生物學(xué)研究中的應(yīng)用變得越來越廣泛，目前主流的NGS儀器平臺為Illumina,、Life Technologies 和 Roche 454,。
對于Illumina 的MiSeq和HiSeq高通量測序平臺而言，測序文庫的定量分析和質(zhì)量評價對于獲得高質(zhì)量的核酸測序數(shù)據(jù)十分關(guān)鍵,。因?yàn)椋?/span>
1.如果測序文庫拷貝數(shù)偏低,，將不能獲得足夠的測序數(shù)據(jù)，導(dǎo)致降低數(shù)據(jù)產(chǎn)出,；
2.如果測序文庫拷貝數(shù)過高，將產(chǎn)生低質(zhì)量的測序數(shù)據(jù),，甚至?xí)?dǎo)致測序失敗,。
2.如果測序文庫拷貝數(shù)過高，將產(chǎn)生低質(zhì)量的測序數(shù)據(jù),，甚至?xí)?dǎo)致測序失敗,。
因此，要控制NGS測序儀上測序文庫的載入量,，保證測序數(shù)據(jù)的質(zhì)量,，就需要在測序前對DNA測序文庫進(jìn)行定量分析。此外,，為減少NGS運(yùn)行成本,，用戶往往需要將不同測序文庫等摩爾量合并為一份測序樣品同時測序，這也以測序文庫的準(zhǔn)確定量分析為前提,，如此才能保證不同文庫的測序數(shù)據(jù)的可靠性,。
以往的llumina TruSeq平臺的測序文庫定量方法費(fèi)時費(fèi)工，且只能提供文庫的濃度信息,。例如：
qPCR-NGS文庫定量法：僅能檢測可擴(kuò)增文庫,，依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線評估文庫拷貝數(shù)，不能*顯示測序文庫片段長度的差異,，容易受引物二聚體或者背景污染影響,，受制于擴(kuò)增效率從而造成定量結(jié)果偏差。
微流體毛細(xì)管電泳法：依賴核酸嵌入式染料發(fā)出的熒光信號,，對于連接錯誤,、單鏈和/或未擴(kuò)增片段的定量分析準(zhǔn)確性低。
分光光度計(jì)法：利用分光光度法,，通過測定文庫對特定波長的光的吸收度,，對文庫進(jìn)行定量分析，準(zhǔn)確性差，無法反應(yīng)測序文庫質(zhì)量,。
Bio-Rad QX100TM ddPCRTM測序文庫定量試劑盒,，可簡單快捷地實(shí)現(xiàn)對Illumina TruSeq測序文庫的質(zhì)量控制；無縫整合進(jìn)Illumina TruSeq 測序工作流程,，同時提供對測序文庫的定量分析（拷貝/微升,，還可轉(zhuǎn)成摩爾濃度）和質(zhì)量評估信息（接頭二聚體和測序片段長度等反映測序文庫質(zhì)量的信息）：
可對測序文庫進(jìn)行定量，無需標(biāo)準(zhǔn)曲線,；還可對測序文庫質(zhì)量進(jìn)行評估,，從而實(shí)現(xiàn)對測序文庫的質(zhì)控以提高NGS測序數(shù)據(jù)質(zhì)量
相比qPCR更準(zhǔn)確的測序文庫質(zhì)量評估
測序文庫裝定量分析結(jié)果可靠性高、重復(fù)性好
有助于多樣本合并測序時各樣本測序文庫含量的配平
能無縫整合進(jìn)Illumina TruSeq 工作流程
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