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EMC-500A高速逆流色譜儀
分離鄰二苯酚,，間苯二酚流程
一． 儀器條件
1. EMC-500A高速逆流色譜儀
轉(zhuǎn)向：正向（正向定義：見儀器標(biāo)識）,；轉(zhuǎn)速：800轉(zhuǎn)/分鐘
2. 8823B紫外檢測器
波長254納米；靈敏度2A
3. EMC-P10泵
流量2毫升/分鐘（壓力保護值設(shè)定1mpa）
4. 3057記錄儀
紙速：6厘米/小時,；量程：100mv
5. 進樣器：2毫升
二． 連接管路
連接順序：溶劑—濾頭—泵入口（下）—泵出口（上）—進樣器入口（“接輸液泵”）—進樣器出口（“接制備柱”）—主機管路入口（標(biāo)記端）—主機管路出口—檢測器入口（下）—檢測器出口（上）—收集瓶（初期建議使用100ml量筒,，以辨認液體分層）
注意：用手擰接頭組件（不提倡使用扳子等工具，以免超負荷損壞）連接管路完成后,，泵入蒸餾水以檢查管路有無液體異常泄露,。
三． 溶劑系統(tǒng)：共1000毫升
1. 正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/1/0.8（V/V）（所用溶劑均為分析純）
2. 固定相：上相 流動相：下相
3. 樣品：鄰二苯酚（化學(xué)純，市售廠）
4. 間苯二酚（分析純,，市售）
四． 操作過程
1. 配制溶劑系統(tǒng)
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml,，用量筒至一玻璃容器內(nèi)，脫氣,，分層分離,。——在實驗開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內(nèi)混合震搖,，注意排氣,，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和,。在實驗開始前1小時內(nèi),，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內(nèi)，并密閉靜置,，防止蒸發(fā),。
按正己烷/乙酸乙酯/甲醇/水=1/0.8/10.8（V/V體積比）共1000ml,，用量筒至一玻璃容器內(nèi)，脫氣,，分層分離,。——在實驗開始前1天，將溶劑配置在同一玻璃容器（推薦磨口三角瓶）內(nèi)混合震搖,，注意排氣,，超聲波脫氣30分鐘后，移液至同一分液漏斗密閉靜置飽和,。在實驗開始前1小時內(nèi),，將兩相溶劑分開放置在兩玻璃容器內(nèi)，并密閉靜置,，防止蒸發(fā),。
2. 樣品制備
在一玻璃容器內(nèi)將預(yù)先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內(nèi)無固體,，如有固體應(yīng)過濾,，以防止塞管路），并密閉靜置,，防止蒸發(fā),。
在一玻璃容器內(nèi)將預(yù)先使用天平稱量的80毫克鄰二苯酚和100毫克間苯二酚混合物溶于3毫升下相中，超聲波脫氣（溶解至溶液內(nèi)無固體,，如有固體應(yīng)過濾,，以防止塞管路），并密閉靜置,，防止蒸發(fā),。
3. 連接泵
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶內(nèi)，*浸入液面以下閉合泵電源開關(guān),，啟動泵,，設(shè)定壓力保護值1mpa（兆帕）。按ph鍵,。
設(shè)定流量：9.99ml分鐘,，按L鍵，按999,，使數(shù)字顯示為999,，按run鍵,。用9.99ml/分鐘流量向主機內(nèi)泵入固定相（上相），注意管路內(nèi)不要有氣體,，至充滿分離柱柱體,，，固定相從主機出口流出5分鐘后,，停泵——按PAU鍵,。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動相（下相）溶劑瓶內(nèi)，*浸入液面以下,。注意管路內(nèi)不要有氣體,。
將泵入口（下）連接的濾頭放入固定相（上相）瓶內(nèi)，*浸入液面以下閉合泵電源開關(guān),，啟動泵,，設(shè)定壓力保護值1mpa（兆帕）。按ph鍵,。
設(shè)定流量：9.99ml分鐘,，按L鍵，按999,，使數(shù)字顯示為999,，按run鍵,。用9.99ml/分鐘流量向主機內(nèi)泵入固定相（上相），注意管路內(nèi)不要有氣體,，至充滿分離柱柱體,，，固定相從主機出口流出5分鐘后,，停泵——按PAU鍵,。迅速將泵入口（下）連接的濾頭換放入流動相（下相）溶劑瓶內(nèi)，*浸入液面以下,。注意管路內(nèi)不要有氣體,。
4. 檢查主機狀態(tài)與管路狀態(tài)。
儀器主機放置在平穩(wěn),、堅實,、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板,，儀器地腳調(diào)實,。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風(fēng)良好,，禁止無關(guān)人員停留與過往,。遠離易燃易爆物品和場所。
打開主機上蓋,，潤滑主機解繞管,，加潔凈潤滑油3－4滴，輕觸機內(nèi)運動部分使其正向旋轉(zhuǎn)3－4圈,，以檢查有無異常,。無異常，關(guān)蓋鎖緊,。
儀器主機放置在平穩(wěn),、堅實,、安全的水平平面上，儀器地腳與平面間放置厚約3毫米的隔震硬橡膠板,，儀器地腳調(diào)實,。環(huán)境：濕度10—30攝氏度，通風(fēng)良好,，禁止無關(guān)人員停留與過往,。遠離易燃易爆物品和場所。
打開主機上蓋,，潤滑主機解繞管,，加潔凈潤滑油3－4滴，輕觸機內(nèi)運動部分使其正向旋轉(zhuǎn)3－4圈,，以檢查有無異常,。無異常，關(guān)蓋鎖緊,。
5. 調(diào)整紫外檢測器
詳見紫外檢測器說明書調(diào)整紫外檢測器波長到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測器光源插頭座,，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈,，用紫外檢測器工具將擋圈選下,，取出（出廠時已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃,，將擋圈旋緊,，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母,，接好光源插頭座。將波長轉(zhuǎn)換開關(guān)置于254處,。小心安妥保管280nm濾光片,，并做標(biāo)記（注：在不使用280nm燈時,，均應(yīng)/可置于254處——衰減大）紫外檢測器-在逆流色譜儀主機運轉(zhuǎn)開始前40分鐘通電預(yù)熱。
詳見紫外檢測器說明書調(diào)整紫外檢測器波長到254nm：（在切斷市電的情況下）解脫紫外檢測器光源插頭座,，旋開光源固定螺母，取出空心陰極燈,，用紫外檢測器工具將擋圈選下,，取出（出廠時已裝上的）280nm濾光片。裝入透紫玻璃,，將擋圈旋緊,，再將燈放回原處，旋緊光源固定螺母,，接好光源插頭座。將波長轉(zhuǎn)換開關(guān)置于254處,。小心安妥保管280nm濾光片,，并做標(biāo)記（注：在不使用280nm燈時,，均應(yīng)/可置于254處——衰減大）紫外檢測器-在逆流色譜儀主機運轉(zhuǎn)開始前40分鐘通電預(yù)熱。
6. 啟動主機：
將后面板轉(zhuǎn)向開關(guān)置于“正向”處,、閉合速度控制其電源開關(guān)：緩慢調(diào)節(jié)多圈電位器旋鈕調(diào)整控制器指針（順時為加速,，逆時為減速），顯示表指針預(yù)定位置,，一般取轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分鐘,。
泵入流動相：設(shè)定流量：2.0ml/min。按L鍵,，按200,，使數(shù)字顯示為200，按run鍵,。
注意：在泵入流動相的全部時間內(nèi),，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進入流動相（下相）溶劑瓶內(nèi)液面以下。
將后面板轉(zhuǎn)向開關(guān)置于“正向”處,、閉合速度控制其電源開關(guān)：緩慢調(diào)節(jié)多圈電位器旋鈕調(diào)整控制器指針（順時為加速,，逆時為減速），顯示表指針預(yù)定位置,，一般取轉(zhuǎn)速800轉(zhuǎn)/分鐘,。
泵入流動相：設(shè)定流量：2.0ml/min。按L鍵,，按200,，使數(shù)字顯示為200，按run鍵,。
注意：在泵入流動相的全部時間內(nèi),，要求保證泵入口（下）連接的濾頭始終*進入流動相（下相）溶劑瓶內(nèi)液面以下。
7. 調(diào)整紫外檢測器靈敏度
閉合紫外檢測器電源開關(guān),，預(yù)熱完成后,，當(dāng)流動相進入紫外檢測器吸收池中，將量程范圍調(diào)節(jié)鈕旋至T檔,，調(diào)節(jié)透過率調(diào)節(jié)旋鈕,，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點。T透過率,。A吸收度（透過率負對數(shù)）,，數(shù)值是以A檔為基準(zhǔn)的倍率。紫外檢測器與記錄儀信號連線時應(yīng)紅線對紅插座,，黑線對黑插座,。
閉合紫外檢測器電源開關(guān),，預(yù)熱完成后,，當(dāng)流動相進入紫外檢測器吸收池中，將量程范圍調(diào)節(jié)鈕旋至T檔,，調(diào)節(jié)透過率調(diào)節(jié)旋鈕,，使數(shù)字顯示5（mv）-量程低點。T透過率,。A吸收度（透過率負對數(shù)）,，數(shù)值是以A檔為基準(zhǔn)的倍率。紫外檢測器與記錄儀信號連線時應(yīng)紅線對紅插座,，黑線對黑插座,。
8. 閉合記錄儀電源開關(guān)
設(shè)定記錄儀：紙速：6厘米/小時。量程：100mv,?；€，5mv,。并放下記錄筆,。
設(shè)定記錄儀：紙速：6厘米/小時。量程：100mv,?；€，5mv,。并放下記錄筆,。
9. 進樣（將樣品液體裝進到進樣器定量管內(nèi)）
調(diào)整進樣器狀態(tài)使手柄在“進樣”標(biāo)記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體,，排除針筒,、針筒針頭內(nèi)全部氣體，旋松進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口處“,？”筒的針頭刺入并連接在進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口上,。用手旋緊進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口處“外六方金屬體”
推進針筒內(nèi)全部樣品液體到進樣器定量管內(nèi)（使液體從進樣器“溢出”標(biāo)記處管路溢出，以便排除管路氣體）,。
在樣品進入定量管內(nèi)到樣品進入柱管前的期間內(nèi),，注意不要使樣品流失,。！,！
調(diào)整進樣器狀態(tài)使手柄在“進樣”標(biāo)記位。用潔凈針筒針頭吸取全部樣品液體,，排除針筒,、針筒針頭內(nèi)全部氣體，旋松進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口處“,？”筒的針頭刺入并連接在進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口上,。用手旋緊進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口處“外六方金屬體”
推進針筒內(nèi)全部樣品液體到進樣器定量管內(nèi)（使液體從進樣器“溢出”標(biāo)記處管路溢出，以便排除管路氣體）,。
在樣品進入定量管內(nèi)到樣品進入柱管前的期間內(nèi),，注意不要使樣品流失,。！,！
10. 進樣/接柱
在流動相從檢測器出口流出后,，將進樣器狀態(tài)調(diào)整至“接柱”標(biāo)記——進樣：進樣器定量管內(nèi)樣品液體接進到主機分離柱管系統(tǒng)內(nèi)。進樣后約3小時第二峰出完,。
在1進樣同時,，2啟動記錄儀走紙按鍵，3放下紀(jì)錄筆,，4調(diào)整記錄儀狀態(tài)至走紙,，5按回零/測量按鍵兩次，在記錄紙上做標(biāo)記,，并確認處于測量狀態(tài),。6檢查泵運行狀態(tài)，確認泵出的液體正常流出,。7紀(jì)錄實驗各項參數(shù),，時間，狀態(tài)等,。
收集檢測器出口流出液體,。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃,，并適當(dāng)密閉
在流動相從檢測器出口流出后,，將進樣器狀態(tài)調(diào)整至“接柱”標(biāo)記——進樣：進樣器定量管內(nèi)樣品液體接進到主機分離柱管系統(tǒng)內(nèi)。進樣后約3小時第二峰出完,。
在1進樣同時,，2啟動記錄儀走紙按鍵，3放下紀(jì)錄筆,，4調(diào)整記錄儀狀態(tài)至走紙,，5按回零/測量按鍵兩次，在記錄紙上做標(biāo)記,，并確認處于測量狀態(tài),。6檢查泵運行狀態(tài)，確認泵出的液體正常流出,。7紀(jì)錄實驗各項參數(shù),，時間，狀態(tài)等,。
收集檢測器出口流出液體,。以環(huán)保方式處理和保管廢棄液體。建議：液體暫裝容器采用透明無色玻璃,，并適當(dāng)密閉
圖 EMC-500A-HSCCC分離間苯二酚和鄰苯二酚的色譜圖
五． 試驗結(jié)束
逆時針調(diào)整多調(diào)速器圈電位器旋鈕歸零,，關(guān)斷逆流色譜儀調(diào)速器開關(guān)，主機運轉(zhuǎn)停止,。管段記錄儀,，紫外檢測器電源等開關(guān)。因儀器系統(tǒng)能耗不大,，建議各儀器市電插頭集中就近插放,。
實驗完畢，立即使用5-10kg壓力的潔凈空氣排出逆流色譜儀主機儀器內(nèi)大部分液體,，潔凈空氣由主機入口（標(biāo)記端）管路接入,。然后大流量泵入潔凈液體沖洗儀器內(nèi)殘留液體。沖洗過程中多次斷續(xù)切換進樣器狀態(tài),，以沖洗進樣器,。
主機內(nèi)殘留液體沖洗完畢，切斷各儀器電源,。針頭可留在進樣器的“進樣器”標(biāo)記處管路口處,，將針管脫離取下。
保留逆流色譜儀主機內(nèi)潔凈液體，待近期下次使用,。如近期（1個月以內(nèi)）不使用逆流色譜儀,，需使用潔凈空氣排出逆流色譜儀主機儀器內(nèi)全部液體,，使用壓力0.5-1Mpa,持續(xù)時間≧40分鐘,，保留泵內(nèi)潔凈液體，將泵的液體管路出入口均置于同一容器液體內(nèi),，待近期下次使用,。
六． 提示與警告
慎用或禁用：
1． 含有鹽類的液體溶劑系統(tǒng)。
2． 含有易于結(jié)晶,、沉淀,、粘稠的液體溶劑系統(tǒng)與樣品。——上述溶劑系統(tǒng)極易于阻塞工作管路,，造成儀器的*性損壞,。
3． 當(dāng)工作鼓內(nèi)缺少液體時禁止儀器運轉(zhuǎn)。
提示：
1. 寒冷的地區(qū)/季節(jié)/室內(nèi),，建議給液體和儀器適當(dāng)溫度,，以避免內(nèi)部結(jié)晶。
2. 每一次泵入液體前,，務(wù)必檢查/設(shè)定泵的壓力保護值1Mpa.
3. 變換溶劑系統(tǒng)后,，檢查/調(diào)整平衡。出廠時的配重溶劑系統(tǒng)比重r=1,。
4. HSCCC是高速旋轉(zhuǎn)類儀器,，請用戶對操作者給以明確的安全使用指導(dǎo)。
5. 會影響記錄曲線美觀的因素：在壓力和溫度變化時,，液體和樣品內(nèi)析出的氣體,。樣品顏色。
保管：儀器存放于0℃以上的潔凈通風(fēng)室內(nèi),。
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