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高速逆流色譜儀常用溶劑體系選擇方法
1. 已知的溶劑體系
| 被分離物質(zhì)種類 | 基本兩相溶劑體系 | 輔助溶劑 |
| 非極性或弱性物質(zhì) | 正庚（已）烷-甲醇 | 氯烷烴 |
| | 正庚（已）烷-乙腈- | 氯烷烴 |
| | 正庚（己）烷-甲醇（或乙腈）-水 | |
| 中等極性物質(zhì) | 氯仿-水 | 甲醇,，正丙醇，異丙醇 |
| | 乙酸乙酯-水 | 正己烷，甲醇,，正丁醇 |
| 極性物質(zhì) | 正丁醇-水 | 甲醇,，乙酸 |
2. 分配系數(shù)測定法
一個穩(wěn)定的兩相溶劑體系是否適合于目標物質(zhì)的分離,，通常要看物質(zhì)在該溶劑體系中的分配系數(shù)是否在一個合適的范圍內(nèi),。分配系數(shù)K=CS/CM或CU/CL。其中CS指溶質(zhì)在固定相中的濃度,，CM指在流動相中的濃度,，CU指溶質(zhì)在上相中的濃度，CL指溶質(zhì)在下相中的濃度,。一般而言,，對HSCCCzui合適的K值范圍是0.5~2。當CS/CM≤0.5時,，出峰時間太快,，峰之間的分離度較差；當CS/CM≥1時,，出峰時間太長且峰形變寬,。而當0.5<CS/CM<2時，可以在合適的時間內(nèi),，得到分離度較好的峰形,。
溶質(zhì)的分配系數(shù)可以采用分析型HPLC來確定。如果有目標成分的對照品或標準品,，當溶質(zhì)在兩個互混溶的液相中分配之后,，各組分的濃度即可用HPLC測定出來，從而計算出分配系數(shù)K值,。如果沒有目標成分的標準品,，混合物中各組分的分配系數(shù)值可以通過下述方法進行簡單的計算：即先將一定量的樣品溶解在體積為Vu的上層溶液中，然后再用體積為VL的下層進行分配,，分別測定分配前和分配后上層溶液中各組分的響應值,，然后用圖1所示的方法即可計算出分配系數(shù),。同樣，也可以采用薄層色譜法來測定各組分的分配系數(shù),。
3. HPLC掃描法
對于一個未知樣品，可以通過HPLC掃描的方法,，對樣品的復雜程度及其組分的極性程度有一個初步的了解,。具體來講，可以將樣品注入一根15cm長的C18HPLC柱,，以乙腈和水為流動相,，以1ml/min流速，從100%乙腈梯度洗脫1h,，觀察樣品出峰的位置,。如果絕大部分峰的保留時間都小于15min，也就意味著這些組分是由含量小于25%的乙腈流動相洗脫出來的,，在CCC中可以采用極性溶劑體系,，如正丁醇-水等；如果峰的保留時間是在15～50min之間,，意味著這些物質(zhì)具有中等極性,，在CCC中可以采用中等極性溶劑；如果絕大部分峰在50min后洗脫出來,，也就是由大于80%的乙腈流動相洗脫出來的,，那么在CCC分離中應該采用弱極性的容積體系。
4. 薄層色譜法
采用薄層色譜（TLC）法也可選擇對HSCCC合適的兩相溶劑體系,。在硅膠板上作薄層色譜試驗,，用水飽和的有機層（即兩相中的有機相）作展開劑。如果需要分離的組分的Rf＞0.5（低級性溶質(zhì)）,，這說明此種條件適用于這些組分混合物的分離,，而且弱極性的有機相適用于作流動相。對于極性較大的溶質(zhì)Rf＜0.5,，則極性較強的那一相可作流動相,。這種方法只能給出應選溶劑體系的大體指示，因為TLC本身就包含有分配和吸附兩種機理,，而CCC則是純粹的液-液分配過程,。然而，TLC仍不失為一種簡便易行的手段,，當小量的樣品在溶劑體系的兩相之間分配時,，TLC仍能用來檢查其分布狀況。比如,，如果發(fā)現(xiàn)樣品幾乎全分布在一相之中,，那么這個溶劑體系是不能用的,。
5. 生物活性物質(zhì)分配比率法
這是一種只適合于具有生物活性成分的方法，其原理基于需分離的混合物的生物活性分布規(guī)律,。首先振搖溶有樣品的兩相溶劑體系,，然后分別測定上層和下層溶液的生物活性。在兩相中活性分布比較均衡的溶劑體系即可采用,。這一方法的缺點是要獲得生物測試的結(jié)果往往需要較長的時間,。該方法主要用于抗生素的分離。
6. 分析型HSCCC法
用分析型HSCCC法來選擇制備型分離時所用的溶劑體系是一種很實用的方法,。由于其柱體積小,、所需溶劑量少，在很短的時間內(nèi)即可獲得合適溶劑體系的信息,。
溶劑體系的選擇和優(yōu)化是一項復雜而艱巨的工作,，目前有關溶劑體系的選擇方法和評價體系較多，但是系統(tǒng)性和理論性較差,，實際操作起來較為困難,。因此，在實際工作中,，溶劑體系的篩選通常更多的是參考已知的溶劑體系,，或者根據(jù)經(jīng)驗而進
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