手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
核被膜（nuclear envelope）是包被核內(nèi)含物的雙層膜結(jié)構(gòu),，作為界膜，它把細胞核與細胞質(zhì)分開,，有利于穩(wěn)定基因的結(jié)構(gòu),，外核膜與胞質(zhì)中的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)相鄰,，外表亦有核糖體附著，內(nèi)核膜附著有一層纖維狀蛋白網(wǎng),，該結(jié)構(gòu)對內(nèi)膜具有支撐作用,。核間隙與粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔相通，內(nèi)含多種蛋白質(zhì)和酶,，核膜還控制著細胞核與細胞質(zhì)之間的物質(zhì)交換,。
分離核膜幾乎都以肝臟為原料，但不同類型的研究用不同的制備方法,，有些方法適合于膜組成的研究,，有些方法適合于酶與通透性研究?；旧戏譃榈碗x子強度和高離子強度法,。高離子濃度法用高濃度的陽離子使膜破裂，該方法能獲得較高產(chǎn)量的膜,。低離子濃度法可使膜具有形態(tài)完整并保留的酶活性高,。Kaufmann等用高離子強度介質(zhì)快速從鼠肝細胞核中分離完整核膜，幾乎不受污染,，對研究核基質(zhì)和核被膜間的關(guān)系非常有用,。Fraser等用DNase處理染色體分離核被膜碎片，染色體污染少,。
本文講述用高速冷凍離心機進行核膜的亞分級分離的方法和步驟,。
1. 把核被膜（大約1~2mg蛋白質(zhì)）懸浮在5ml冰冷的10mmol/L三乙醇胺-HCl、0.1mmol/L蔗糖（pH=7.5）中,，再加入0.5ml 20%（體積分數(shù)） Triton X-100,，在0℃孵育10分鐘。
2. 該懸浮液,，在45000gmax離心,，使核被膜沉降。
3. 把沉淀重新懸浮在5mL相同的緩沖液里（不加去垢劑）,，再加入5ml 100mmol/L 三乙醇胺-HCl,、2.0mol/L NaCl。
4. 在0℃孵育10分鐘后,，懸浮液再發(fā)步驟2離心,，沉淀是管孔復合體疊層膜,。
在所有步驟中，勻漿重懸是基本步驟,，在往沉淀里加2~3滴甘油搖動或手工勻漿,。用1%（質(zhì)量濃度）檸檬酸（1ml/mg核蛋白）抽提細胞核來制備外核膜，通過低速離心上清液在120000gmax離心（6*14ml甩開轉(zhuǎn)子,，26500r/min）,、4℃離心1小時來沉淀膜。
湖南湘立研制生產(chǎn)的幾款醫(yī)用離心機可以用來進行細胞分離,，如DL5M/TDL5M兩種型號的低速冷凍離心機可用來進行干細胞實驗,。XL03RH型控溫離心機（低速冷凍離心機）可用來進行溫度敏感型人體細胞分離。
相關(guān)產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品,，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品,，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責，不承擔此類作品侵權(quán)行為的直接責任及連帶責任,。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負版權(quán)等法律責任,。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心