如何消除組織培養(yǎng)的污染,？上海信帆生物給大家支招,！

當(dāng)重要的培養(yǎng)污染時，研究者可能試圖消除或控制污染,。首先,，確定污染物是細菌、真菌,、支原體或酵母,，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養(yǎng)器皿和超凈臺,，檢查HEPA過濾器,。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而,，做劑量反應(yīng)實驗確定抗生素和抗霉菌素產(chǎn)生毒性的劑量水平,。這點在使用抗生素如兩性霉素B和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養(yǎng)污染的實驗步驟,。

1）在無抗生素的培養(yǎng)基中消化,、計數(shù)和稀釋細胞，稀釋到常規(guī)細胞傳代的濃度,。

2）分散細胞懸液到多孔培養(yǎng)板中,，或幾個小培養(yǎng)瓶中。在一個濃度梯度范圍內(nèi),，把選擇抗生素加入到每一個孔中,。例如，兩性霉素B推薦下列濃度,，0.25,，0.50，1.0,，2.0,，4.0,8.0 mg/ml。

3）每天觀測細胞毒性指標(biāo),，如脫落,，出現(xiàn)空泡，匯合度下降和變圓,。

4）確定抗生素毒性水平后,，使用低于毒性濃度2-3倍濃度的抗生素的培養(yǎng)液培養(yǎng)細胞2-3代。

5）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)細胞一代,。

6）重復(fù)步驟4,。

7）在無抗生素的培養(yǎng)基中培養(yǎng)4-6代,，確定污染是否以已被消除。

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