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灌流液
1） 無(wú)鈣灌流液：每1000ml含NaCl 8.3g,、KCl 0.5g,、Hepes 2.4g、NaOH（1mol/L）6ml,，在37℃時(shí),，PH=7.5，滲透壓為315mOsm,；
2） 膠元酶灌流液：每100ml含NaCl 0.4g,、KCl 0.05g、Hepes 2.4g、CaCl2·2H2O 0.07g,、NaOH（1mol/L）6.6ml,、膠元酶IV 0.05g，在37℃時(shí),，PH=7.6,，滲透壓為305mOsm；
3） 肝細(xì)胞洗液：100ml無(wú)鈣灌流液中加入1.5g小牛血清蛋白,，在37℃時(shí),，PH=7.4。
4） PBS：每100ml含NaCl 8.0g,、KCl 0.2g,、CaCl2 0.1g、MgCl2·6H2O 0.1g,、NaH2 PO4·2H2O 1.42g,、KH2 PO4 0.2g，在37℃時(shí),，PH=7.4
方法：麻醉與手術(shù),。于大鼠腹膜腔內(nèi)注射5%苯*50mg/kg，將麻醉后的大鼠仰面固定在木板上,，木板下墊有吸水棉墊,，剪去腹部體毛，用碘酒和酒精消毒腹部皮膚,，從腹中線(xiàn)處剪開(kāi)腹壁,，暴露肝臟和與之相連的血管并找出門(mén)靜脈和下腔靜脈。將門(mén)靜脈與其相連的腸系膜和結(jié)締組織分離,。用套管針以20度角在門(mén)靜脈遠(yuǎn)端向近端平行刺入,，結(jié)扎，固定套管針以封閉門(mén)靜脈遠(yuǎn)端,，立即在下腔靜脈壁上剪開(kāi)一小口,，以便血液和灌流后的液體從此口流出。
灌流：*步用蠕動(dòng)泵將200ml無(wú)鈣灌流液經(jīng)灌流管道及接在其末端的套管針泵入靜脈,，10ml/min，15~20min,，第二步用100ml膠元酶繼續(xù)灌流,，流速5~10ml/min，保持灌流溫度在37℃,。
肝臟處理：將經(jīng)過(guò)灌流的肝臟從大鼠腹腔取出,，用剪刀剪成0.3cm3大小的碎塊，放入燒杯，在燒杯加入肝細(xì)胞洗液100ml,，置燒杯在搖床上輕搖6~10分鐘,，所得的細(xì)胞懸液經(jīng)孔徑為300μm的尼龍膜過(guò)濾后，倒入50ml離心管,，低速離心3~5分鐘,，棄上清液，再加入PBS 100~150ml,，用吸管輕輕吹打沉在管底的細(xì)胞,，制成肝臟細(xì)胞懸液，分離實(shí)質(zhì)細(xì)胞和非實(shí)質(zhì)細(xì)胞,。
湖南湘立研制生產(chǎn)的幾款醫(yī)用離心機(jī)可以用來(lái)進(jìn)行細(xì)胞分離,，如DL5M/TDL5M兩種型號(hào)的低速冷凍離心機(jī)可用來(lái)進(jìn)行干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。XL03RH型控溫離心機(jī)（低速冷凍離心機(jī)）可用來(lái)進(jìn)行溫度敏感型人體細(xì)胞分離,。
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