流式細(xì)胞儀介紹

流式細(xì)胞儀就是進(jìn)行流式細(xì)胞分析的儀器,，它集電子技術(shù),、計算機(jī)技術(shù)、激光技術(shù),、流體理論于一體,，是一種非常先進(jìn)的檢測儀器，被譽(yù)為試驗(yàn)室的“CT”,。

流式細(xì)胞術(shù)（Flow CytoMeter, FCM）是一種在功能水平上對單細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行定量分析和分選的檢測手段,，它可以高速分析上萬個細(xì)胞，并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù),，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比,，具有速度快、精度高,、準(zhǔn)確性好等優(yōu)點(diǎn),，成為當(dāng)代的細(xì)胞定量分析技術(shù)。

工作原理

將待測細(xì)胞染色后制成單細(xì)胞懸液,。用一定壓力將待測樣品壓入流動室,，不含細(xì)胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度,，這樣,，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動，組成一個圓形的流束,，待測細(xì)胞在鞘液的包被下單行排列,，依次通過檢測區(qū)域,。 　　流式細(xì)胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束,，垂直照射在樣品流上,，被熒光染色的細(xì)胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光,。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收,。光散射信號在前向小角度進(jìn)行檢測，這種信號基本上反映了細(xì)胞體積的大??；熒光信號的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,，形成多個不同波長的熒光信號,。 　　這些熒光信號的強(qiáng)度代表了所測細(xì)胞膜表面抗原的強(qiáng)度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號,，再通過模／數(shù)轉(zhuǎn)換器,，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機(jī)識別的數(shù)字信號。計算機(jī)把所測量到的各種信號進(jìn)行計算機(jī)處理,，將分析結(jié)果顯示在計算機(jī)屏幕上,，液可以打印出來，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進(jìn)一步分析,。

檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇,。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達(dá)，其X軸為測量強(qiáng)度,，Y軸為細(xì)胞數(shù)目,。一般來說，坐標(biāo)軸的分辨率有512或1024通道數(shù),，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定,。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù)，既可以單獨(dú)顯示每個參數(shù)的直方圖,，也可以選擇二維的三點(diǎn)圖,、等高線圖、灰度圖或三維立體視圖,。

細(xì)胞的分選是通過分離含有單細(xì)胞的液滴而實(shí)現(xiàn)的,。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體，充電后振動,，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,，待測定細(xì)胞就分散在這些液滴之中。將這些液滴充以正負(fù)不同的電荷,，當(dāng)液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時,，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器,，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞的分離,。

應(yīng)用范圍

可用于白血病的分型、腫瘤細(xì)胞染色體的異倍性測定,，以及免疫學(xué)研究,，并已開始用于細(xì)菌鑒定，病毒感染細(xì)胞的識別合愛滋病感染者T4,、T8細(xì)胞的記數(shù),。

自70年代以來,，隨著流式細(xì)胞技術(shù)水平的不斷提高,，其應(yīng)用范圍也日益廣泛。流式細(xì)胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學(xué),、血液學(xué),、腫瘤學(xué)、細(xì)胞生物學(xué),、細(xì)胞遺傳學(xué),、生物化學(xué)等臨床醫(yī)學(xué)和基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。

技術(shù)特點(diǎn)

作為一種的細(xì)胞定量分析檢測儀器,，設(shè)計上采用了許多*的技術(shù),，其中涉及到液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng),、信號測量和細(xì)胞分選等4個方面,。

展望

從細(xì)胞技術(shù)開始發(fā)展到今天，60年代至70年代是其飛速發(fā)展時期,，激光技術(shù),、噴射技術(shù)以及計算機(jī)的應(yīng)用使在原理和結(jié)構(gòu)上形成了固定的模式。

80年代則是的商品化時期,，這期間不斷有新型號的儀器推出,，在多參數(shù)檢測技術(shù)上不斷提高。

進(jìn)入90年代,，隨著微電子技術(shù)特別是計算機(jī)技術(shù)的發(fā)展,，計算能力不斷提高，的功能也越來越強(qiáng)大,。在數(shù)據(jù)管理,、數(shù)據(jù)分析方面有了長足進(jìn)步。但是,，在技術(shù)原理和設(shè)計方面并沒有突破性的進(jìn)展,。人們的注意力開始轉(zhuǎn)向的應(yīng)用,，新的熒光探針、新的熒光染料,、新的染色方法不斷推出,，使流式細(xì)胞技術(shù)在新的細(xì)胞參數(shù)分析方面日益發(fā)展。

從新推出的儀器看,，會在硬件上不斷更新,，采用更新的器件（入半導(dǎo)體激光、大規(guī)模集成電路）,，以實(shí)現(xiàn)小型化,；用數(shù)字電路取代模擬電路，充分發(fā)揮微處理器的功能以實(shí)現(xiàn)簡單化,；在軟件上提高數(shù)據(jù)自動分析能力,，充分發(fā)揮圖形界面的優(yōu)點(diǎn)，使操作更加簡便,。