流式細胞儀介紹

流式細胞儀就是進行流式細胞分析的儀器，它集電子技術(shù),、計算機技術(shù),、激光技術(shù)、流體理論于一體,，是一種非常先進的檢測儀器,，被譽為試驗室的“CT”,。

流式細胞術(shù)（Flow CytoMeter, FCM）是一種在功能水平上對單細胞或其他生物粒子進行定量分析和分選的檢測手段，它可以高速分析上萬個細胞,，并能同時從一個細胞中測得多個參數(shù),，與傳統(tǒng)的熒光鏡檢查相比，具有速度快,、精度高,、準確性好等優(yōu)點，成為當代的細胞定量分析技術(shù),。

工作原理

將待測細胞染色后制成單細胞懸液,。用一定壓力將待測樣品壓入流動室，不含細胞的磷酸緩沖液在高壓下從鞘液管噴出,，鞘液管入口方向與待測樣品流成一定角度，這樣,，鞘液就能夠包繞著樣品高速流動,，組成一個圓形的流束，待測細胞在鞘液的包被下單行排列,，依次通過檢測區(qū)域,。 　　流式細胞儀通常以激光作為發(fā)光源。經(jīng)過聚焦整形后的光束,，垂直照射在樣品流上,，被熒光染色的細胞在激光束的照射下，產(chǎn)生散射光和激發(fā)熒光,。這兩種信號同時被前向光電二極管和90°方向的光電倍增管接收,。光散射信號在前向小角度進行檢測，這種信號基本上反映了細胞體積的大??；熒光信號的接受方向與激光束垂直，經(jīng)過一系列雙色性反射鏡和帶通濾光片的分離,，形成多個不同波長的熒光信號,。 　　這些熒光信號的強度代表了所測細胞膜表面抗原的強度或其核內(nèi)物質(zhì)的濃度，經(jīng)光電倍增管接收后可轉(zhuǎn)換為電信號,，再通過模／數(shù)轉(zhuǎn)換器,，將連續(xù)的電信號轉(zhuǎn)換為可被計算機識別的數(shù)字信號。計算機把所測量到的各種信號進行計算機處理,，將分析結(jié)果顯示在計算機屏幕上,，液可以打印出來，還可以數(shù)據(jù)文件的形式存儲在硬盤上以備日后的查詢或進一步分析,。

檢測數(shù)據(jù)的顯示視測量參數(shù)的不同由多種形式可供選擇,。單參數(shù)數(shù)據(jù)以直方圖的形式表達，其X軸為測量強度，Y軸為細胞數(shù)目,。一般來說,，坐標軸的分辨率有512或1024通道數(shù)，這視其模數(shù)轉(zhuǎn)換器的分辨率而定,。對于雙參數(shù)或多參數(shù)數(shù)據(jù),，既可以單獨顯示每個參數(shù)的直方圖，也可以選擇二維的三點圖,、等高線圖,、灰度圖或三維立體視圖。

細胞的分選是通過分離含有單細胞的液滴而實現(xiàn)的,。在流動室的噴口上配有一個超高頻電晶體,，充電后振動，使噴出的液流斷裂為均勻的液滴,，待測定細胞就分散在這些液滴之中,。將這些液滴充以正負不同的電荷，當液滴流經(jīng)帶有幾千伏特的偏轉(zhuǎn)板時,，在高壓電場的作用下偏轉(zhuǎn),，落入各自的收集容器中，不予充電的液滴落入中間的廢液容器,，從而實現(xiàn)細胞的分離,。

應(yīng)用范圍

可用于白血病的分型、腫瘤細胞染色體的異倍性測定,，以及免疫學研究,，并已開始用于細菌鑒定，病毒感染細胞的識別合愛滋病感染者T4,、T8細胞的記數(shù),。

自70年代以來，隨著流式細胞技術(shù)水平的不斷提高,，其應(yīng)用范圍也日益廣泛,。流式細胞術(shù)已普遍應(yīng)用于免疫學、血液學,、腫瘤學,、細胞生物學、細胞遺傳學,、生物化學等臨床醫(yī)學和基礎(chǔ)醫(yī)學研究領(lǐng)域,。

技術(shù)特點

作為一種的細胞定量分析檢測儀器，設(shè)計上采用了許多*的技術(shù),，其中涉及到液流系統(tǒng),、光路系統(tǒng),、信號測量和細胞分選等4個方面。

展望

從細胞技術(shù)開始發(fā)展到今天,，60年代至70年代是其飛速發(fā)展時期,，激光技術(shù)、噴射技術(shù)以及計算機的應(yīng)用使在原理和結(jié)構(gòu)上形成了固定的模式,。

80年代則是的商品化時期,，這期間不斷有新型號的儀器推出，在多參數(shù)檢測技術(shù)上不斷提高,。

進入90年代,，隨著微電子技術(shù)特別是計算機技術(shù)的發(fā)展，計算能力不斷提高,，的功能也越來越強大,。在數(shù)據(jù)管理、數(shù)據(jù)分析方面有了長足進步,。但是,，在技術(shù)原理和設(shè)計方面并沒有突破性的進展。人們的注意力開始轉(zhuǎn)向的應(yīng)用,，新的熒光探針,、新的熒光染料,、新的染色方法不斷推出,，使流式細胞技術(shù)在新的細胞參數(shù)分析方面日益發(fā)展。

從新推出的儀器看,，會在硬件上不斷更新,，采用更新的器件（入半導體激光、大規(guī)模集成電路）,，以實現(xiàn)小型化,；用數(shù)字電路取代模擬電路，充分發(fā)揮微處理器的功能以實現(xiàn)簡單化,；在軟件上提高數(shù)據(jù)自動分析能力,，充分發(fā)揮圖形界面的優(yōu)點，使操作更加簡便,。