火腿腸是深受廣大消費(fèi)者歡迎的肉類食品,我國(guó)已出臺(tái)并在2007年6月1日實(shí)施《火腿腸》國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB/T2012-2006）,，標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了根據(jù)原料不同又有“雞肉腸”,、“魚肉腸”、“牛肉腸”等品種,。為防止食品變質(zhì),，生產(chǎn)廠家常在火腿腸中加入防腐劑。我國(guó)目前常用食品防腐劑主要有苯甲酸及其鈉鹽,、山梨酸及其鉀鹽為主,。防腐劑可以抑制和殺滅微生物，但過(guò)量和超范圍使用會(huì)破壞食品中維生素,、加重人體肝臟負(fù)擔(dān)并引起毒性反應(yīng),。國(guó)標(biāo)GB2760-1996《食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)》中規(guī)定火腿腸類肉制品食品中苯甲酸不得檢出，山梨酸及其鉀鹽（以山梨酸計(jì)）不得超過(guò)0.075g/kg,。在日常檢測(cè)工作中仍可在火腿腸樣品中檢出苯甲酸和超標(biāo)加入的山梨酸,。

    火腿腸中苯甲酸和山梨酸的測(cè)定樣品處理方法，在國(guó)標(biāo)GB/T5009. 29 - 2003中苯甲酸,、山梨酸測(cè)定的液相色譜法中,，只規(guī)定了飲料和配制酒樣品處理方法,其它樣品處理沒(méi)有提及?；鹜饶c食品中含高蛋白,、高脂肪及淀粉等基質(zhì)成份較多,并且苯甲酸、山梨酸具有脂溶性的性質(zhì)決定了樣品處理的復(fù)雜性,。南京科捷針對(duì)火腿腸食品特點(diǎn),，對(duì)液相色譜法測(cè)定火腿腸中苯甲酸、山梨酸的樣品處理方法進(jìn)行了改進(jìn)和研究,，建立了有效的液相色譜法測(cè)定火腿腸食品中防腐劑含量的樣品處理方法,。

二、LC-10Tvp梯度液相色譜儀配置

LC-10Tvp高壓恒流泵：2臺(tái)

SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器：1臺(tái) 
SCL-10Tvp 系統(tǒng)控制器：1臺(tái)
7725i手動(dòng)進(jìn)樣閥： 1套 
色譜工作站：1套    （VI2010,、N2000,、N3000選用）
液相色譜柱：1支     （C18 4.6*250mn,5um）
微量進(jìn)樣器：1支     （50ul/100ul）

   進(jìn)樣支架  ：1只     （進(jìn)樣閥用）
三、LC-10Tvp梯度液相色譜儀特點(diǎn)

LC-10Tvp梯度液相色譜儀是南京科捷分析儀器有限公司為了快速地滿足多樣化的客戶需求,，在原有的STI501液相色譜儀的基礎(chǔ)上經(jīng)過(guò)優(yōu)化,，利用美國(guó)*技術(shù)開發(fā)設(shè)計(jì)，國(guó)內(nèi)加工生產(chǎn)的的一款新型的液相色譜儀,。LC-10Tvp等度液相色譜儀實(shí)現(xiàn)了人機(jī)對(duì)話,，可實(shí)時(shí)對(duì)儀器的運(yùn)行狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)控，并可對(duì)潛在和已出現(xiàn)的故障做出判斷,，同時(shí)提供在線解決方案,。該儀器也全面實(shí)現(xiàn)了遠(yuǎn)程的準(zhǔn)無(wú)人操作，大大提高了儀器的使用效率,，同時(shí)通過(guò)高精度的AS1000自動(dòng)進(jìn)樣系統(tǒng),，實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化進(jìn)樣，zui大程度抑制了樣品的交叉污染,，提供樣品分析精度,。LC-10Tvp等度液相色譜儀可廣泛應(yīng)用于研究開發(fā)、醫(yī)藥檢驗(yàn),、食品檢測(cè),、化工分析、環(huán)境監(jiān)測(cè)等眾多分析領(lǐng)域,。

主要特點(diǎn)
    豐富的功能——符合客戶對(duì)分析的不同需求
    硬件具有VP功能,，記錄維護(hù)信息和操作記錄，符合GLP/GMP要求,；系統(tǒng)控制器增具有時(shí)鐘,、溫度計(jì)、濕度計(jì)等人性化設(shè)計(jì)的功能,。
    的性能——滿足客戶對(duì)儀器的嚴(yán)格要求
    檢測(cè)器采用進(jìn)口氘燈,、光電池以及1200條/mm凹面光柵組成的雙光束單色器,；精密加工的雙透鏡流通池，控制波長(zhǎng)調(diào)節(jié)的高精度微處理器以及雙路高速的采樣頻率,，確保了低噪聲,、低漂移及超高靈敏度等特點(diǎn)。
    VI2010工作站符合多種法規(guī)要求,。

    可靠的結(jié)果——滿足客戶對(duì)結(jié)果的準(zhǔn)確要求
    與進(jìn)口儀器做對(duì)比試驗(yàn),分析結(jié)果具有高度的一致性,。

    簡(jiǎn)便的操作——便于客戶對(duì)軟件的熟練操作
    軟件采用多窗口模式，操作方便,。
    精美的外觀——滿足客戶對(duì)儀器的視覺(jué)要求
    外形精美,，帶來(lái)視覺(jué)上的享受。
技術(shù)指標(biāo) 

四,、火腿腸中苯甲酸和山梨酸的測(cè)定的詳細(xì)檢測(cè)方法。

1.1 儀器與試劑

LC-10Tvp液相色譜儀

SPD-10Tvp紫外檢測(cè)器

ODS  C18反相色譜柱

HY-4多用樣品振蕩器

0.45μm微孔濾膜

甲醇（色譜純）

0.02mol/L乙酸銨溶液

20目海砂

10g/L氫氧化鈉溶液,100g/L亞鐵溶液,；200g/L乙酸鋅溶液,；苯甲酸、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液

1.2 液相色譜條件

流動(dòng)相:甲醇+乙酸銨溶液（0.02mol/L）=5+95

流速：1.0ml/min

柱溫：室溫

紫外檢測(cè)波長(zhǎng)：230nm

1.3 樣品處理與測(cè)定

將火腿腸樣品用組織搗碎機(jī)均質(zhì)后,，稱取5.0g于具塞三角瓶中,加入2～5g 20目海砂,，攪拌均勻，加入50.0ml水、1.0ml氫氧化鈉溶液,，蓋塞放于樣品振蕩器上振蕩提取1h,，加入9.5ml亞鐵溶液、9.5ml乙酸鋅溶液,振搖使其充分混勻后,靜置1～2h使其沉淀（也可用離心機(jī)以3000轉(zhuǎn)/min,離心10min）,。用濾紙初濾去除脂肪和沉淀物,，收集初濾液用0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，取濾液10μl進(jìn)行HPLC測(cè)定,。

2 結(jié)果

2. 1樣品提取條件的選擇

在堿性條件下，苯甲酸與山梨酸形成相應(yīng)的鹽類而易溶于水,，故加入氫氧化鈉溶液使之形成可溶于水的鹽,。用水提取樣品中苯甲酸、山梨酸可選用超聲波法,、振蕩法,、直接浸泡法?；鹜饶c樣品在用組織搗碎機(jī)均質(zhì)后,，非常黏稠并易結(jié)成塊狀，不能與提取液充分接觸,，而造成提取效率低,。故在樣品中加入海砂，以分散黏稠的樣品,使與提取液充分接觸,。在樣品加入提取液后分別用超聲波提取30min,、振蕩提取1h、直接浸泡過(guò)夜（24h）然后過(guò)濾,取濾液進(jìn)行HPLC測(cè)定,，對(duì)這三種樣品提取方法的結(jié)果進(jìn)行了比較,。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析,直接浸泡和超聲波提取方法結(jié)果回收率低,不能滿足檢測(cè)方法的要求,只有振蕩法回收率達(dá)到方法要求。原因是振蕩器提取是通過(guò)不斷振蕩,，海砂不斷沖擊分散黏稠成塊的樣品,，使樣品與提取液充分接觸混勻，從而提取*,，結(jié)果回收率高,故選用振蕩提取方式用于本方法的檢測(cè),。

2. 2 蛋白質(zhì)和淀粉對(duì)分析方法干擾與消除

火腿腸樣品中含有豐富的蛋白質(zhì)和部分淀粉,樣品在浸泡提取過(guò)程中,會(huì)含有大量的水溶性蛋白質(zhì)和淀粉，如果凈化不*,，直接過(guò)膜進(jìn)行HPLC分析,，將堵塞色譜柱,嚴(yán)重影響色譜柱的使用壽命。因此火腿腸樣品處理的關(guān)鍵是找到一種理想的沉淀劑,盡量排除樣品中的油脂,、蛋白質(zhì),、淀粉等,并且不影響待測(cè)組分的回收率。常用食品蛋白沉淀劑有100g/L硫酸銅溶液,、100g/L鎢酸鈉溶液,、100g/L亞鐵與200g/L乙酸鋅溶液,。硫酸銅溶液對(duì)于蛋白質(zhì)含量低的樣品尚可,而對(duì)于火腿腸食品則不理想,經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)初濾液混濁不能通過(guò)濾膜。鎢酸鈉溶液沉淀效果好些,經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)初濾液仍有堵塞濾膜的現(xiàn)象,。亞鐵和乙酸鋅溶液作為沉淀劑通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)效果,不僅可沉淀蛋白質(zhì),還可使淀粉變性沉淀,基本可使提取液澄清,初濾液可順利通過(guò)濾膜,故選用亞鐵與乙酸鋅作為沉淀劑,。

2. 3 脂肪對(duì)分析方法的干擾與消除

提取液所含的脂肪在振蕩時(shí)可成球狀懸浮在上層,并且在加入蛋白沉淀劑后,還可減少脂肪的乳化作用使脂肪與提取液充分分離。對(duì)于脂肪含量很高的樣品,可將樣品提取液置于沸水浴中15min使脂肪充分熔化,取出冷至室溫后,放于. 1℃冰箱中進(jìn)行冷凍處理,大多數(shù)脂肪在冰點(diǎn)處析出,樣品提取液中基本不含脂肪,，從而消除脂肪對(duì)實(shí)驗(yàn)方法的干擾,。

2. 4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

分別配制0.01、0.02,、0.05,、0.10、0.15,、0.20mg/ml濃度的苯甲酸,、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行分析,根據(jù)峰面積和濃度關(guān)系繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到苯甲酸、山梨酸的回歸方程,。苯甲酸回歸方程: Y = 2.865×106X+2131,r=0. 9996;山梨酸回歸程:Y=2.269×106X+2250,r =0. 9994,。標(biāo)準(zhǔn)系列濃度在0. 01～0. 20mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。苯甲酸,、山梨酸檢出限（S/N = 3）均為2.0mg/kg,。

2. 5 方法精密度和回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果

取已測(cè)定含量的火腿腸樣品,分別添加高、中,、低三種不同濃度的苯甲酸,、山梨酸標(biāo)準(zhǔn)液,按本方法進(jìn)行提取,各進(jìn)行6次測(cè)定,結(jié)果見表。

五 結(jié)果

采用本方法處理火腿腸樣品,可有效改變火腿腸樣品在均質(zhì)后黏稠成塊的現(xiàn)象,使樣品均勻分散在提取液中,達(dá)到提高結(jié)果回收率的目的,。在堿性條件下加入亞鐵和乙酸鋅可有效沉淀分離樣品中含有的蛋白質(zhì),、脂肪、淀粉等基質(zhì),沉淀劑不干擾苯甲酸,、山梨酸測(cè)定,樣品濾液無(wú)懸浮物質(zhì)起到保護(hù)色譜柱,延長(zhǎng)色譜柱使用壽命作用,。本方法回收率在90. 9%～95. 1%之間, RSD在1. 26% ～3. 25%之間,標(biāo)準(zhǔn)系列濃度在0. 01～0. 20mg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系,*方法分析的要求,適宜在日常檢測(cè)工作中應(yīng)用。