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兔子環(huán)磷酸腺苷（cAMP）檢測試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍： 96T

20pg/ml- 600pg/ml

使用目的：

本試劑盒用于測定兔子血清,、血漿及相關液體樣本中環(huán)磷酸腺苷（cAMP）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中兔子環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平,。用純化的兔子環(huán)

磷酸腺苷（cAMP）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入環(huán)磷酸腺

苷（cAMP）,，再與HRP 標記的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）抗體結合,，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，

經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色,。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色,，并在酸的作用下

轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的環(huán)磷酸腺苷（cAMP）呈正相關,。用酶標儀在450nm

波長下測定吸光度（OD 值）,，通過標準曲線計算樣品中兔子環(huán)磷酸腺苷（cAMP）濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（1200pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取,，提取按相關文獻進行,，提取后應盡快進行實驗。若不能

馬上進行試驗,，可將標本放于-20℃保存,，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支,，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀

釋。

600pg/ml 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

300pg/ml 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

150pg/ml 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

75pg/ml 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

37.5pg/ml 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑,，其余各步操作相同）,、標準孔、

待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，

然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部,，盡

量不觸及孔壁,，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘,。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜,，棄去液體，甩干,，每孔加滿洗滌液,，靜置30 秒后棄去，如此

重復5 次,，拍干,。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外,。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5,。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl,，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色

15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl,，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零,，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）,。 測定應在加終止

液后15 分鐘以內(nèi)進行。

操作程序總結：

計算

以標準物的濃度為橫坐標,，OD 值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的

OD 值由標準曲線查出相應的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD 值計算出標

準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD 值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，

即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1．試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30 分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未

用完，板條應裝入密封袋中保存,。

2．濃洗滌液可能會有結晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結果。

3．各步加樣均應使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間

控制在5 分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復孔,。如標本中待測物質含量過高（樣本OD 值

大于標準品孔*孔的OD 值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n 倍）后再測定,，計

算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6．底物請避光保存,。

7．嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8．所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理,。

9．本試劑不同批號組分不得混用。

保存條件及有效期

1．試劑盒保存：,；2-8℃,。

2．有效期：6 個月