手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)手機(jī)版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關(guān)注視頻號
說明：考馬斯亮蘭法（Bradford 法）,，是目前靈敏度zui高的蛋白質(zhì)測定法之一,。考馬斯亮蘭
G-250 染料,，在酸性溶液中與蛋白質(zhì)結(jié)合,，使染料的zui大吸收峰由 465nm 變?yōu)?595nm，溶
液的顏色也由棕黑色變?yōu)樘m色,。在595nm 下測定的吸光度值A(chǔ)595,，與蛋白質(zhì)濃度成正比。
包裝：
考馬斯亮蘭溶液 300 毫升
蛋白標(biāo)準(zhǔn)（BSA ） 10 毫升（1mg/ml）
產(chǎn)品說明書 1 份
保存： 2℃-8 ℃ （BSA 蛋白標(biāo)準(zhǔn)-20℃）
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 從冰箱取出考馬斯亮蘭溶液,，平衡至室溫并混勻,；預(yù)熱分光光度計(jì)20 分鐘或酶標(biāo)儀,。
2. 以分光光度計(jì)測;準(zhǔn)備九支管，分別編號,，按下列順序加樣,。
編號 1 2 3 4 8 6 7 8 9
去離子水μl 100 90 80 60 40 20 0
蛋白標(biāo)準(zhǔn)μl 0 10 20 40 60 80 100
樣品μl 100 100
考馬斯亮蘭溶液ml 3 3 3 3 3 3 3 3 3
混勻、,，2~5分鐘后,，以第1 號試管為空白對照595nm，測定各樣品收值A(chǔ)595,，樣品管8,、
9 取平均值
相當(dāng)濃度mg/ml 0 0.1 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0
注：樣品和試劑比可以按比例放大或縮小。
微孔檢測時(shí),，可以按比例縮小，但總體積不小于100ul,。
性能指標(biāo)：
在20～1200ug/ml 有著比較好的線性,。當(dāng)吸光度大于0.8A 時(shí)，請把樣本稀釋后再做,。
注意：
1.使用塑料或玻璃比色皿,。如使用石英比色皿，使用后立即用少量95%的乙醇蕩洗,，以
洗去染色用完后
可以乙醇反復(fù)清洗,。塑料比色皿決不可用乙醇或丙酮長時(shí)間浸泡。
2.本方法標(biāo)準(zhǔn)曲線有輕微的非線性,，因而不能用Beer 定律進(jìn)行計(jì)算,，而只能用標(biāo)準(zhǔn)曲線來
測定
3.比色順序從蛋白濃度低的管開始，中間不必清洗比色杯,，以免影響結(jié)果,。
4.疏水蛋白或粘蛋白，可能與染料發(fā)生沉淀,，加入等體積1N NaOH 可以消除,。
5.如果知道樣品的蛋白大體濃度，可以采用相近的3 管做標(biāo)準(zhǔn)曲線,。
6. 由于各種蛋白質(zhì)中的精氨酸和芳香族氨基酸的含量不同,，因此Bradford 法用于不同蛋白
質(zhì)測定時(shí)有較大的
偏差，在制作 標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)通常選用 g—球蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì),，以減少這方面的偏差,。
7. 有一些物質(zhì)干擾此法的測定，主要的干擾物質(zhì)有：去污劑,、 Triton X-100 ,、十二烷基硫
酸鈉（SDS ）和 0.1N
的NaOH。（如同0.1N 的酸干擾Lowary 法一樣）。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品,，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,，應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品,，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對其真實(shí)性負(fù)責(zé)，不承擔(dān)此類作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體,、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí)，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源,，并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任,。
- 如涉及作品內(nèi)容、版權(quán)等問題,，請?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關(guān)權(quán)利。
采購中心