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人白介素23(IL-23)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書

來源:上海滬峰生物科技有限公司   2013年02月27日 14:07  

人白介素23(IL-23)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
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使用目的:
本試劑盒用于測定人血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中白介素23(IL-23)含量。
實驗原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人白介素23(IL-23)水平,。用純化的人白介素23(IL-23)抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白介素23(IL-23),,再與HRP標記的白介素23(IL-23)抗體結(jié)合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色,,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的白介素23(IL-23)呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品中人白介素23(IL-23)濃度。
試劑盒組成
1 20倍濃縮洗滌液 20ml×1瓶 7 終止液 3ml×1瓶
2 酶標試劑 3ml×1瓶 8 標準品(10000ng/L) 0.5ml×1瓶
3 酶標包被板 12孔×4條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1瓶
4 樣品稀釋液 3ml×1瓶 10 說明書 1份
5 顯色劑A液 3ml×1瓶 11 封板膜 2張
6 顯色劑B液 3ml×1/瓶 12 密封袋 1個
標本要求
1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關(guān)文獻進行,,提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20℃保存,,但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。
操作步驟
1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋,。
5000ng/L 5號標準品 150μl的原倍標準品加入150μl標準品稀釋液
2500 ng/L 4號標準品 150μl的5號標準品加入150μl標準品稀釋液
1250 ng/L 3號標準品 150μl的4號標準品加入150μl標準品稀釋液
625 ng/L 2號標準品 150μl的3號標準品加入150μl標準品稀釋液
312.5 ng/L 1號標準品 150μl的2號標準品加入150μl標準品稀釋液


2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同)、標準孔,、待測樣品孔,。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。
3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用
5. 洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,,如此重復(fù)5次,,拍干。
6. 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外,。
7. 溫育:操作同3。
8. 洗滌:操作同5,。
9. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37℃避光顯色15分鐘.
10. 終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。
11. 測定:以空白空調(diào)零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

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