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大鼠神經(jīng)元烯醇化酶（NSE）ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)
大鼠神經(jīng)元烯醇化酶（NSE）ELISA試劑盒
（用于血清,、血漿,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗大鼠 NSE 單抗包被于酶標(biāo)板上,，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 NSE與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗大鼠NSE,，形成免疫復(fù)合物連接在板上,，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合，加入底物工作液顯藍(lán)色,，zui后加終止液硫酸,，在450nm處測(cè)OD值，NSE濃度與OD值成正比,，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)求出標(biāo)本中NSE濃度,。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標(biāo)板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標(biāo)抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×標(biāo)本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：1000ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| *抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 收集標(biāo)本：血清,、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽、肝素抗凝）,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測(cè)，2-8℃保存48小時(shí),；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,，避免反復(fù)凍融。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻,，配成1000ng/ml的溶液,。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,，*管加標(biāo)本稀釋液900ul，第二至第八管加入標(biāo)本稀釋液500ul,。在*管中加入1000ng/ml的標(biāo)準(zhǔn)品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,，移至第二管。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋?zhuān)瑥牡谄吖苤形?/span>500ul棄去,。第八管為空白對(duì)照,。
3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋?zhuān)?/span>示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋?zhuān)ㄊ纠?/span>1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測(cè)程序
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次，向?yàn)V紙上印干,。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘。
4. 洗板：同前,。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul,。將反應(yīng)板置37℃30分鐘。
6. 洗板：同前,。
7. 每孔加入底物工作液100ul,，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘。
8. 每孔加入100ul終止液混勻,。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值,。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品100,、50,、25、12.5,、6.2,、3.1、1.56,、0 ng/ml為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上作圖,，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線(xiàn)圖上查出相應(yīng)NSE含量。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的NSE 檢測(cè)濃度小于1ng/ml,。
2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠NSE,。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于12％,。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高,。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥,。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷,！
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