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大鼠氧化還原酶-1（NQO-1）ELISA試劑盒
（用于血清,、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和尿液生物體液內(nèi)）
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗大鼠 NQO-1 單抗包被于酶標(biāo)板上,，標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 NQO-1與單抗結(jié)合，加入生物素化的抗大鼠NQO-1,，形成免疫復(fù)合物連接在板上，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,，加入底物工作液顯藍(lán)色,，zui后加終止液硫酸，在450nm處測(cè)OD值,，NQO-1濃度與OD值成正比,，可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NQO-1濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標(biāo)板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標(biāo)抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×標(biāo)本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 標(biāo)準(zhǔn)品（Standards）：0.4mU/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| *抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1. 收集標(biāo)本：血清,、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽、肝素抗凝）,、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、尿液等盡早檢測(cè),，2-8℃保存48小時(shí),；更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍（-20℃或-70℃）保存，避免反復(fù)凍融,。血清,、血漿標(biāo)本測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液作1：20稀釋（取10ul，加標(biāo)本稀釋液190ul,稀釋20倍）,。
2. 標(biāo)準(zhǔn)品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,，配成800mU/L的溶液。設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,，每管加入標(biāo)本稀釋液200ul,。在*管中加入800mU/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul，移至第二管,。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,，從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對(duì)照,。
3. 10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測(cè)程序
1. 加樣：每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul，將反應(yīng)板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2. 洗板：用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,，向?yàn)V紙上印干,。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板：同前,。
5. 每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置37℃30分鐘,。
6. 洗板：同前,。
7. 每孔加入底物工作液100ul，置37℃暗處反應(yīng)15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻,。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1. 所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算,。
2. 以標(biāo)準(zhǔn)品400,、200、100,、50,、25、12.5,、6.25,、0 mU/L為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上作圖,，畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NQO-1含量,，再乘上稀釋倍數(shù)即可,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的NQO-1 檢測(cè)濃度小于3mU/L。
2. 特異性：可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠NQO-1,。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng),。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10.6％,。
注意事項(xiàng)
1. 以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,，每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
2. 洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高,。
3. 板條開(kāi)封后剩余板條要再封好，保持板條干燥,。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
5. 本試劑盒僅用于科研，不能用于臨床診斷,！
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