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大鼠氧化還原酶-1(NQO-1)ELISA試劑盒

來(lái)源:上海西唐生物科技有限公司   2013年02月20日 11:16  

 

55229872   http://www.westang.com
大鼠氧化還原酶-1(NQO-1)ELISA試劑盒
 用于血清,、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液和尿液生物體液內(nèi)
 
原理
本實(shí)驗(yàn)采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗大鼠 NQO-1 單抗包被于酶標(biāo)板上,,標(biāo)準(zhǔn)品和樣品中的 NQO-1與單抗結(jié)合,加入生物素化的抗大鼠NQO-1,,形成免疫復(fù)合物連接在板上,辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的Streptavidin與生物素結(jié)合,,加入底物工作液顯藍(lán)色,,zui后加終止液硫酸,在450nm處測(cè)OD值,,NQO-1濃度與OD值成正比,,可通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出標(biāo)本中NQO-1濃度。
試劑盒組成2-8℃保存)

酶標(biāo)板(Coated Wells
96
酶標(biāo)抗體工作液(Enzyme Conjugate
12ml
10×標(biāo)本稀釋液(Sample Buffer
12ml
20×濃縮洗滌液(Wash Buffer
50ml
標(biāo)準(zhǔn)品(Standards):0.4mU/
2
底物工作液(TMB Solution
12ml
*抗體工作液(Biotinylated Antibody
12ml
終止液Stop Solution
12ml

準(zhǔn)備試劑與收集血樣
1.          收集標(biāo)本:血清,、血漿(EDTA,、檸檬酸鹽、肝素抗凝),、細(xì)胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿、尿液等盡早檢測(cè),,2-8保存48小時(shí),;更長(zhǎng)時(shí)間須冷凍(-20℃-70℃)保存,避免反復(fù)凍融,。血清,、血漿標(biāo)本測(cè)定前用標(biāo)本稀釋液作120稀釋(取10ul,加標(biāo)本稀釋液190ul,稀釋20倍),。
2.          標(biāo)準(zhǔn)品液配制:使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,,配成800mU/L的溶液設(shè)標(biāo)準(zhǔn)管8管,,每管加入標(biāo)本稀釋液200ul,。在*管中加入800mU/L的標(biāo)準(zhǔn)品溶液200ul混勻后用加樣器吸出200ul,移至第二管,。如此反復(fù)作對(duì)倍稀釋,,從第七管中吸出200ul棄去。第八管為空白對(duì)照,。
3.          10×標(biāo)本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋(示例:1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水),。
4.         洗滌液:用重蒸水1:20稀釋(示例:1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水)
檢測(cè)程序
1.          加樣:每孔各加入標(biāo)準(zhǔn)品或待測(cè)樣品100ul,將反應(yīng)板充分混勻后置37120分鐘,。
2.          洗板:用洗滌液將反應(yīng)板充分洗滌4-6次,,向?yàn)V紙上印干,。
3.          每孔中加入*抗體工作液100ul。將反應(yīng)板充分混勻后置3760分鐘,。
4.          洗板:同前,。
5.          每孔加酶標(biāo)抗體工作液100ul。將反應(yīng)板置3730分鐘,。
6.          洗板:同前,。
7.          每孔加入底物工作液100ul,置37暗處反應(yīng)15分鐘,。
8.          每孔加入100ul終止液混勻,。
9.          30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)吸光值。
結(jié)果計(jì)算與判斷
1.          所有OD值都應(yīng)減除空白值后再行計(jì)算,。
2.          以標(biāo)準(zhǔn)品400,、200100,、50,、2512.5,、6.25,、0 mU/L為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),,在坐標(biāo)紙上作圖,,畫(huà)出標(biāo)準(zhǔn)曲線。
3.          根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應(yīng)NQO-1含量,,再乘上稀釋倍數(shù)即可,。
試劑盒性能
             1.   靈敏度zui小的NQO-1 檢測(cè)濃度小于3mU/L
2.        特異性:可同時(shí)檢測(cè)重組或天然的大鼠NQO-1,。不與大鼠其它細(xì)胞因子有交叉反應(yīng),。
3.        重復(fù)性:板內(nèi)、板見(jiàn)變異系數(shù)均小于10.6%,。
注意事項(xiàng)
             1.   以上標(biāo)準(zhǔn)孔及待測(cè)樣品均建議做復(fù)孔,,每次測(cè)定應(yīng)同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線。
 2.   洗滌過(guò)程很關(guān)鍵,。洗滌不充分將導(dǎo)致度誤差及OD值錯(cuò)誤地升高,。
             3.   板條開(kāi)封后剩余板條要再封好,保持板條干燥,。
             4.   本試劑盒宜置4oC冰箱保存,。
 5.   本試劑盒僅用于科研,不能用于臨床診斷,!

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