手機版
化工儀器網(wǎng)手機版
化工儀器網(wǎng)小程序
官方微信
公眾號：chem17
掃碼關注視頻號
大鼠核轉(zhuǎn)錄因子p65（NF-kB p65）ELISA試劑盒
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗大鼠 NF-kB p65單抗包被于酶標板上,，標準品和樣品中的 NF-kB p65與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗大鼠NF-kB p65，形成免疫復合物連接在板上,，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,，加入底物工作液顯藍色，zui后加終止液硫酸,，在450nm處測OD值,，NF-kB p65濃度與OD值成正比，可通過繪制標準曲線求出標本中NF-kB p65濃度,。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 標準品（Standards）：20ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| *抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清,、血漿（EDTA）、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測,，2-8℃保存48小時；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,，避免反復凍融,。
2. 標準品液配制：使用前加入1ml蒸餾水混勻，配成20ng/ml的溶液,。設標準管8管,，*管加標本稀釋液900ul，第二至第八管加入標本稀釋液500ul,。在*管中加入20ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,，移至第二管。如此反復作對倍稀釋,，從第七管中吸出500ul棄去,。第八管為空白對照。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
標本激活方法
1. 將450ul標本稀釋液加入到一支1.5ml進口聚丙烯管中,再加10ul血清或血漿標本,。
2. 加20ul 1 N HCI,蓋緊，上下混勻,。2－8℃放置60± 2分鐘,。
3. 加20ul 1 N NaOH,蓋緊，上下混勻,。
4. 即用,，或放-20/-70℃保存3天。計算結(jié)果時乘以稀釋倍數(shù)50,。（注意：不同的標本NF-kB p65的水平可能有較大差異,，請根據(jù)實際情況靈活掌握稀釋度）
5. 細胞培養(yǎng)上清或組織勻漿10倍稀釋（410ul的標本稀釋液＋50ul樣本＋20ul的1N HCI+20ul的1N NaOH）。
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品（已激活）100ul,，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應板置37℃30分鐘,。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,，置37℃暗處反應15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值,。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算,。
2. 以標準品2000、1000,、500、250,、125,、62.5、31.2,、0 pg/ml為橫坐標,，OD值為縱坐標，在坐標紙上作圖,，畫出標準曲線,。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應NF-kB p65含量，再乘上稀釋倍數(shù)即可,。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的NF-kB p65檢測濃度小于15pg/ml,。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠NF-kB p65。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應,。
3. 重復性：板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于8.9％。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,，每次測定應同時做標準曲線,。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高,。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥。
相關產(chǎn)品
免責聲明
- 凡本網(wǎng)注明“來源：化工儀器網(wǎng)”的所有作品,，均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權或有權使用的作品,，未經(jīng)本網(wǎng)授權不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品。已經(jīng)本網(wǎng)授權使用作品的,，應在授權范圍內(nèi)使用,，并注明“來源：化工儀器網(wǎng)”。違反上述聲明者,，本網(wǎng)將追究其相關法律責任,。
- 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來源（非化工儀器網(wǎng)）的作品，目的在于傳遞更多信息,，并不代表本網(wǎng)贊同其觀點和對其真實性負責,，不承擔此類作品侵權行為的直接責任及連帶責任。其他媒體,、網(wǎng)站或個人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時,，必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來源，并自負版權等法律責任,。
- 如涉及作品內(nèi)容,、版權等問題，請在作品發(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,，否則視為放棄相關權利,。
采購中心