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大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子（Neuritin）ELISA試劑盒說明書
大鼠神經(jīng)營養(yǎng)因子（Neuritin）ELISA試劑盒
（用于血清、血漿,、細胞培養(yǎng)上清液和其它生物體液內(nèi)）
原理
本實驗采用雙抗體夾心 ABC-ELISA法,。用抗大鼠 Neuritin 單抗包被于酶標板上，標準品和樣品中的 Neuritin與單抗結(jié)合,，加入生物素化的抗大鼠Neuritin,，形成免疫復合物連接在板上，辣根過氧化物酶標記的Streptavidin與生物素結(jié)合,，加入底物工作液顯藍色,，zui后加終止液硫酸，在450nm處測OD值,，Neuritin濃度與OD值成正比,，可通過繪制標準曲線求出標本中Neuritin濃度。
試劑盒組成（2-8℃保存）
| 酶標板（Coated Wells） | 96孔 | 酶標抗體工作液（Enzyme Conjugate） | 12ml |
| 10×標本稀釋液（Sample Buffer） | 12ml | 20×濃縮洗滌液（Wash Buffer） | 50ml |
| 標準品（Standards）：10ng/瓶 | 2瓶 | 底物工作液（TMB Solution） | 12ml |
| *抗體工作液（Biotinylated Antibody） | 12ml | 終止液（Stop Solution） | 12ml |
準備試劑與收集血樣
1. 收集標本：血清,、血漿（EDTA,、檸檬酸鹽、肝素抗凝）,、細胞培養(yǎng)上清液,、組織勻漿等盡早檢測，2-8℃保存48小時,；更長時間須冷凍（-20℃或-70℃）保存,，避免反復凍融。血清至少10倍稀釋,血漿可以不在稀釋,。
2. 標準品液配制：使用前加入0.5ml蒸餾水混勻,，配成20ng/ml的溶液。設標準管8管,，*管加標本稀釋液900ul,，第二至第八管加入標本稀釋液500ul。在*管中加入20ng/ml的標準品溶液100ul混勻后用加樣器吸出500ul,，移至第二管,。如此反復作對倍稀釋，從第七管中吸出500ul棄去,。第八管為空白對照,。
3. 10×標本稀釋液用蒸餾水作1:10倍稀釋（示例：1ml濃稀釋液+9ml蒸餾水）,。
4. 洗滌液：用重蒸水1:20稀釋（示例：1ml濃縮洗滌液加入19ml的重蒸水）
檢測程序
1. 加樣：每孔各加入標準品或待測樣品100ul，將反應板充分混勻后置37℃120分鐘,。
2. 洗板：用洗滌液將反應板充分洗滌4-6次,，向濾紙上印干。
3. 每孔中加入*抗體工作液100ul,。將反應板充分混勻后置37℃60分鐘,。
4. 洗板：同前。
5. 每孔加酶標抗體工作液100ul,。將反應板置37℃30分鐘,。
6. 洗板：同前。
7. 每孔加入底物工作液100ul,，置37℃暗處反應15分鐘,。
8. 每孔加入100ul終止液混勻。
9. 30分鐘內(nèi)用酶標儀在450nm處測吸光值,。
結(jié)果計算與判斷
1. 所有OD值都應減除空白值后再行計算,。
2. 以標準品2000、1000,、500,、250、125,、62.5,、31.2、0 pg/ml為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上作圖，畫出標準曲線,。
3. 根據(jù)樣品OD值在該曲線圖上查出相應Neuritin含量,，再乘上稀釋倍數(shù)即可。
試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的Neuritin 檢測濃度小于15pg/ml,。
2. 特異性：可同時檢測重組或天然的大鼠Neuritin,。不與大鼠其它細胞因子有交叉反應。
3. 重復性：板內(nèi),、板見變異系數(shù)均小于10％,。
注意事項
1. 以上標準孔及待測樣品均建議做復孔,，每次測定應同時做標準曲線,。
2. 洗滌過程很關鍵。洗滌不充分將導致度誤差及OD值錯誤地升高,。
3. 板條開封后剩余板條要再封好,，保持板條干燥,。
4. 本試劑盒宜置4oC冰箱保存。
5. 本試劑盒僅用于科研,，不能用于臨床診斷,！
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