如何解決色譜柱使用過程出現(xiàn)的問題
問題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料,、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k),分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k),,分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k),,柱效(N)
問題:
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異、進樣量大,、進樣閥與色譜柱之間,、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大,、接頭死體積大等,。
表現(xiàn):
柱效(N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k),柱效變化很小
保留因子(k),,分離因子(α)
保留因子(k),,柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時間不夠
柱超載樣品量太大
表現(xiàn):
保留因子(k),柱效變化很小
保留因子(k),,柱效(N)
造成色譜峰(不對稱)拖尾的原因
1.色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷,;
2.柱頭有污染;
3.樣品超載,;
4.樣品溶劑不合適,;
5.柱外效應(yīng);
6.化學(xué)或二次保留(硅羥基)效應(yīng),;
7.緩沖容量不足或不合適,;
8.重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A.與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題
1.流動相中,,加入30mM的三乙胺(用于堿性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物),,未知化合物加醋酸三乙胺;
2.如仍然拖尾,,將三乙胺換為二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺),;
3.降低進樣量至<1μg。
B.與色譜柱有關(guān)的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚,,反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇,,加1%氫氧化銨混合液沖洗;正向柱可用甲醇沖洗;
2.使用保護柱,。
C.與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大,,(通常≤25μL);
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(*連接管應(yīng)<20cm,,內(nèi)徑為0.007"),;
3.檢測器流通池的體積過大。
慧德易公司*代理DEVELOSIL,、Chisso公司的色譜柱及色譜耗材產(chǎn)品,;
一級代理TOSOH(東曹)、YMC,、Shodex(昭和),、陶氏等色譜柱及色譜耗材產(chǎn)品;
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問題:
不同色譜柱間差異
使用期間柱變化
原因:
填料,、鍵合相不同
柱床破壞
鍵合相丟失
硅膠基質(zhì)溶解
強保留組分堆積堵塞
表現(xiàn):
保留因子(k),分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k),,分離因子(α)
柱效(N)
保留因子(k),,柱效(N)
問題:
柱外效應(yīng)
原因:
系統(tǒng)差異、進樣量大,、進樣閥與色譜柱之間,、色譜柱與檢測器之間的管路太長、檢測器流通池體積大,、接頭死體積大等,。
表現(xiàn):
柱效(N)
問題:
分離效果變差
原因:
流動相組分改變
流速改變
溫度改變
表現(xiàn):
保留因子(k),柱效變化很小
保留因子(k),,分離因子(α)
保留因子(k),,柱效變化很小
問題:
柱平衡慢
原因:
重新平衡時間不夠
柱超載樣品量太大
表現(xiàn):
保留因子(k),柱效變化很小
保留因子(k),,柱效(N)
造成色譜峰(不對稱)拖尾的原因
1.色譜柱本身填裝問題,篩板堵塞或填料塌陷,;
2.柱頭有污染;
3.樣品超載,;
4.樣品溶劑不合適,;
5.柱外效應(yīng);
6.化學(xué)或二次保留(硅羥基)效應(yīng),;
7.緩沖容量不足或不合適,;
8.重金屬污染。
如何解決峰形拖尾的問題
A.與化學(xué)有關(guān)的拖尾問題
1.流動相中,,加入30mM的三乙胺(用于堿性化合物)或醋酸胺(用于酸性化合物),,未知化合物加醋酸三乙胺;
2.如仍然拖尾,,將三乙胺換為二甲基辛胺(或醋酸二甲基辛胺),;
3.降低進樣量至<1μg。
B.與色譜柱有關(guān)的拖尾問題
1.如柱頭處有強保留的樣品組分積聚,,反相柱可用20倍柱體積的96%的二氯甲烷與4%甲醇,,加1%氫氧化銨混合液沖洗;正向柱可用甲醇沖洗;
2.使用保護柱,。
C.與HPLC系統(tǒng)有關(guān)的峰拖尾和峰加寬
1.進樣體積過大,,(通常≤25μL);
2.進樣閥與色譜柱及檢測器之間的管路體積過大(*連接管應(yīng)<20cm,,內(nèi)徑為0.007"),;
3.檢測器流通池的體積過大。
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