日韩av大片在线观看欧美成人不卡|午夜先锋看片|中国女人18毛片水多|免费xx高潮喷水|国产大片美女av|丰满老熟妇好大bbbbbbbbbbb|人妻上司四区|japanese人妻少妇乱中文|少妇做爰喷水高潮受不了|美女人妻被颜射的视频,亚洲国产精品久久艾草一,俄罗斯6一一11萝裸体自慰,午夜三级理论在线观看无码

產(chǎn)品推薦:氣相|液相|光譜|質(zhì)譜|電化學(xué)|元素分析|水分測(cè)定儀|樣品前處理|試驗(yàn)機(jī)|培養(yǎng)箱


化工儀器網(wǎng)>技術(shù)中心>工作原理>正文

歡迎聯(lián)系我

有什么可以幫您? 在線(xiàn)咨詢(xún)

一舉兩得,!同時(shí)提取RNA和蛋白,!

來(lái)源:上海北諾生物科技有限公司   2012年12月05日 22:48  
具體的提取步驟如下:
1.樣品加氯仿分層后,移去上層水相(該水相里就是RNA,,可照常繼續(xù)進(jìn)行RNA的提取),加0.3ml乙醇沉淀中間層和有機(jī)相中的DNA,,渦旋混合,,室溫放置3分鐘,2-8℃不超過(guò)2000×g離心5分鐘,?!咀ⅲ哼@一步同時(shí)可以除去未*消化的殘?jiān)?/div>
2.小心吸出沉淀后的上清,加1.5ml異丙醇沉淀蛋白質(zhì)。室溫放置10分鐘,,2-8℃12000×g離心10分鐘棄上清,。
3.加2ml含0.3M鹽酸胍的95%乙醇洗滌蛋白質(zhì)沉淀。室溫放置20分鐘,,2-8℃7500×g離心5分鐘,,棄上清,重復(fù)兩次,?!咀ⅲ翰惶宄槭裁催@個(gè)時(shí)候用這么強(qiáng)烈的變性劑?防止蛋白降解,?】
4.用2ml無(wú)水乙醇同樣方法再洗一次,。
5.真空抽干蛋白質(zhì)沉淀5-10分鐘,用1%SDS溶解蛋白質(zhì),,反復(fù)吸打,,50℃溫浴使其*溶解,不溶物2-8℃10000×g離心10分鐘除去,。分離得到的蛋白質(zhì)樣品可用于Western Blot或-5至-20℃保存?zhèn)溆?。【注:無(wú)水乙醇很容易揮發(fā),,所以幾分鐘就能抽干,;沒(méi)有真空抽干機(jī)也無(wú)所謂,把無(wú)水乙醇倒掉,,開(kāi)蓋子靜置幾分鐘就行了,。這一步干燥千萬(wàn)不能太干了,否則溶解的時(shí)候很不爽——很難溶解.我是在50度水浴中過(guò)夜,,或者每水浴30分鐘就放在超聲清洗機(jī)里清洗10分鐘——雖然不是專(zhuān)門(mén)用來(lái)粉碎細(xì)胞的超聲,,但畢竟是超聲波哦,還是蠻有效果的,。
 
注意事項(xiàng):
1.以上各試劑的用量都是以1mLTrizol為準(zhǔn),,Trizol體積變化,各試劑用量隨之等比例變化,。
2.蛋白質(zhì)沉淀可保存在含0.3M鹽酸胍的95%乙醇或無(wú)水乙醇中2-8℃一個(gè)月以上或-5至-20℃一年以上,。
3.這一步可省去:用0.1% SDS在2-8℃透析三次,10000×g離心10分鐘取上清即可用于Western Blot,。
 
常見(jiàn)問(wèn)題分析:
得率低:
A.樣品裂解或勻漿處理不*
B.zui后得到的蛋白質(zhì)沉淀未*溶解
蛋白質(zhì)降解:組織取出后沒(méi)有馬上處理或冷凍
電泳時(shí)條帶變形:蛋白質(zhì)沉淀洗滌不充分

免責(zé)聲明

  • 凡本網(wǎng)注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”的所有作品,,均為浙江興旺寶明通網(wǎng)絡(luò)有限公司-化工儀器網(wǎng)合法擁有版權(quán)或有權(quán)使用的作品,未經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)不得轉(zhuǎn)載,、摘編或利用其它方式使用上述作品,。已經(jīng)本網(wǎng)授權(quán)使用作品的,應(yīng)在授權(quán)范圍內(nèi)使用,并注明“來(lái)源:化工儀器網(wǎng)”,。違反上述聲明者,,本網(wǎng)將追究其相關(guān)法律責(zé)任。
  • 本網(wǎng)轉(zhuǎn)載并注明自其他來(lái)源(非化工儀器網(wǎng))的作品,,目的在于傳遞更多信息,并不代表本網(wǎng)贊同其觀點(diǎn)和對(duì)其真實(shí)性負(fù)責(zé),,不承擔(dān)此類(lèi)作品侵權(quán)行為的直接責(zé)任及連帶責(zé)任,。其他媒體、網(wǎng)站或個(gè)人從本網(wǎng)轉(zhuǎn)載時(shí),,必須保留本網(wǎng)注明的作品第一來(lái)源,,并自負(fù)版權(quán)等法律責(zé)任。
  • 如涉及作品內(nèi)容,、版權(quán)等問(wèn)題,,請(qǐng)?jiān)谧髌钒l(fā)表之日起一周內(nèi)與本網(wǎng)聯(lián)系,否則視為放棄相關(guān)權(quán)利,。
企業(yè)未開(kāi)通此功能
詳詢(xún)客服 : 0571-87858618