乳糖酸紅霉素是紅霉素的乳糖醛酸鹽,，主要抗菌活性為乳糖酸紅霉素A和含有一定活性的乳糖酸紅霉素B,、C ,。《中國藥典2000年版采用微生物檢定法進行含量測定 ,，英國藥典和歐洲藥典均采用HPLC ,。鑒于微生物檢定法影響因素較多，故采用液相色譜測定乳糖酸紅霉素含量的方法,。紅霉素A（96,。...
   乳糖酸紅霉素是紅霉素的乳糖醛酸鹽，主要抗菌活性為乳糖酸紅霉素A和含有一定活性的乳糖酸紅霉素B,、C ,。《中國藥典2000年版采用微生物檢定法進行含量測定 ,，英國藥典和歐洲藥典均采用HPLC ,。鑒于微生物檢定法影響因素較多，故采用液相色譜測定乳糖酸紅霉素含量的方法,。
1 實驗部分
1．1 儀器與試藥
LC—lOAD HPLC和SPD—IOA紫外檢測器（日本島津）,。紅霉素A（96.7％）、紅霉素B（99.0％）,、紅霉素C（97.3％）對照品（Council of Europe europenpharmacopoeia,，BP 907一F67029 straspourg CEDEX1）；N一去甲基紅霉素A對照品（中國藥品生物制品檢定所）,；注射用乳糖酸紅霉素（大連美羅大藥廠）,；乙腈、甲醇為色譜純,。
1．2 方法與結(jié)果
1．2．1 色譜條件
Hypersil BDS色譜柱（4.6 mln×200 min,，5 ，大連依利特科學儀器有限公司）,，流動相為0.01 mol/L 磷酸氫二鉀一乙腈（60：40）,；稀釋液為pH 7.0磷酸鹽緩沖液一甲醇（15：1）；檢測波長215nm,；流速1.0 ml/min,；柱溫35℃ ；進樣20μL,。
1．2．2 對照品溶液的配制
    精密稱取紅霉素A對照品51.0 mg,、紅霉素B、C對照品2.5 mg和N一去甲基紅霉素A 2.5 mg置25 ml量瓶中,，加稀釋液溶解并稀釋至刻度,，濾過,，取續(xù)濾液作為對照品溶液。進樣20μL進行測定,。
1．2．3 線性關(guān)系
    精密稱取紅霉素A對照品適量（相當于紅霉素25 mg）,，置10 ml量瓶中，加稀釋液至刻度,，搖勻,，濾過。精密量取上述溶液l,、2,、5、10,、20,、40、80,、100μL注入液相色譜儀,，記錄色譜圖，以峰面積對濃度（mg/ml ）繪制標準曲線,。其回歸方程為：A ：98.98c一13.26（r=0.9999）,，表明紅霉素在0.125～l2.5 ?g/ml 的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。
1．2．4 溶液穩(wěn)定性試驗
    取“1．2．7”項下的溶液,。在0,、2、5 h測定主峰面積,，結(jié)果在5 h內(nèi)峰面積無變化,，溶液較穩(wěn)定。
1．2．5 回收率試驗
    考慮到樣品中可能存在游離的乳糖酸,，為了考察其對含量測定的影響,，按“1．2．7”項下濃度的80％、100％,、120％精密稱取乳糖酸紅霉素各兩份,，按工藝配比加入適量乳糖酸鈉輔料，分別置25 ml量瓶中,，加入稀釋液溶解,，至刻度，搖勻,，濾過,，照“1．2．7”項下方法測定含量，計算回收率,。結(jié)果輔料對測定無干擾,。
1．2．6 方法精密度按“1．2．7”項下方法，對同一批號樣品,，分別取樣平行測定5次,，求得含量的RSD=1.6l％，表明分析方法精密度較好,。
1．2．7 樣品的測定
    取樣品適量,，精密稱定，加稀釋液制成含紅霉素2.0 mg/ml 的溶液,。作為供試品溶液,；精密量取供試品溶液20μL，注入液相色譜儀,。另取紅霉素A,、B、C對照品適量,，同法測定,。按外標法以峰面積計算，3批樣品的含量測定按干燥品以乳糖酸紅霉素計,，其結(jié)果分別為93.8％ ,、94.1％和93.7％。
2 討論
    文中試驗主要以乳糖酸紅霉素A計算,，含量測定結(jié)果為乳糖酸紅霉素A,、B、c的總含量 英國藥典（2000版）所用色譜柱為PLPP 100A,，成本較高,，國內(nèi)較少使用。試用ODS柱,，因叔丁醇黏度大,，柱效下降很快，所以,，采用Hypersil BDS 4.6 mm×200mm色譜柱,，各峰間分離度等系統(tǒng)適用性均達到了英國藥典的要求。在試驗中也發(fā)現(xiàn),，由于流動相系統(tǒng)pH
為9.2,，緩沖液僅為0.01 mol/L 磷酸氫二鉀，因此,，流動相的緩沖容量很低,，對色譜柱填料的溶解度較高，使得該方法的耐用性較差,。