人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）elisa試劑盒使用說明書

Elisa kit規(guī)格：48孔配置/96孔配置

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液：1.5ml×1瓶

酶標(biāo)試劑：3 ml×1瓶（48）/6 ml×1瓶（96）

【人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）elisa試劑盒】本試劑僅供研究使用 

計(jì)算：

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),，OD值為縱坐標(biāo),，在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計(jì)算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)際濃度,。

實(shí)驗(yàn)原理：

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）水平,。用純化的人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）抗體包被微孔板,，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）,，再與HRP標(biāo)記的Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）抗體結(jié)合,，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）呈正相關(guān),。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD值）,，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）濃度,。

目的：本試劑盒用于測(cè)定人血清，血漿及相關(guān)液體樣本中Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）的含量,。

服務(wù)承諾： 

供貨期：款到發(fā)貨,。
工作時(shí)間內(nèi)免費(fèi)的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) ,。請(qǐng)
為客戶提供來樣檢測(cè)服務(wù),，zui大限度實(shí)驗(yàn)結(jié)果的有效性（免費(fèi)代測(cè)）,。

保存條件及有效期：

試劑盒保存：2-8℃| 有效期：6個(gè)月 

【人Agouti相關(guān)蛋白（AGRP）elisa試劑盒】樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細(xì)收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行,。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清：檢測(cè)分泌性的成份時(shí),，用無菌管收集。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí)，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細(xì)胞懸液,，細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融，以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

5. 組織標(biāo)本：切割標(biāo)本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度,。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細(xì)收集上清,。分裝后一份待檢測(cè)，其余冷凍備用,。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

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