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細(xì)胞的復(fù)蘇
細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對(duì)細(xì)胞造成損害,。
一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào),。
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào),。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化,。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后,，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
五.制備細(xì)胞懸液：
1.吸棄上清液,。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液,。
六.細(xì)胞計(jì)數(shù)： 細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜,。
七.培養(yǎng)細(xì)胞：
細(xì)胞復(fù)蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細(xì)胞快速融化至37℃,，使細(xì)胞外凍存時(shí)的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時(shí)進(jìn)入細(xì)胞形成再結(jié)晶,，對(duì)細(xì)胞造成損害,。
一. 實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
1.將水浴鍋預(yù)熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺(tái)臺(tái)面。
3.在超凈工作臺(tái)中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細(xì)胞凍存記錄按標(biāo)簽找到所需細(xì)胞的編號(hào),。
2.從液氮罐中取出細(xì)胞盒,，取出所需的細(xì)胞，同時(shí)核對(duì)管外的編號(hào),。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預(yù)熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動(dòng)，使管中的液體迅速融化,。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解,，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺(tái)內(nèi)。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后,，放入離心機(jī)中3000r/min 離心3min
五.制備細(xì)胞懸液：
1.吸棄上清液,。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液，吹打制成細(xì)胞懸液,。
六.細(xì)胞計(jì)數(shù)： 細(xì)胞濃度以5×105/ml為宜,。
七.培養(yǎng)細(xì)胞：
將復(fù)合細(xì)胞計(jì)數(shù)要求的細(xì)胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)，將培養(yǎng)瓶放入37℃5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時(shí)（或者24-48小時(shí)）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng),，換液的時(shí)間由細(xì)胞情況而定,。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤：
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,，導(dǎo)致傳熱不佳,，使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
3.離心前忘記平衡,，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失,。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染,。
初學(xué)者易犯錯(cuò)誤：
1水浴鍋未預(yù)熱或者未預(yù)熱到37℃。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多,，導(dǎo)致傳熱不佳,，使融化時(shí)間延長(zhǎng)。
3.離心前忘記平衡,，導(dǎo)致離心機(jī)損壞和細(xì)胞丟失,。
4.一次復(fù)蘇細(xì)胞過多，忘記更換吸頭和吸管,，導(dǎo)致細(xì)胞交叉污染,。
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