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細胞的復蘇
細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害,。
一. 實驗前準備：
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號,。
2.從液氮罐中取出細胞盒,，取出所需的細胞，同時核對管外的編號,。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化,。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內(nèi),。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液：
1.吸棄上清液,。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,，吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數(shù)： 細胞濃度以5×105/ml為宜,。
七.培養(yǎng)細胞：
細胞復蘇的原則－快速融化：必須將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃，使細胞外凍存時的冰晶迅速融化，避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結(jié)晶，對細胞造成損害,。
一. 實驗前準備：
1.將水浴鍋預熱至37℃
2.用75％酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
3.在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管,、吸管,、培養(yǎng)瓶等等。
二．取出凍存管：
1.根據(jù)細胞凍存記錄按標簽找到所需細胞的編號,。
2.從液氮罐中取出細胞盒,，取出所需的細胞，同時核對管外的編號,。
三．迅速解凍：
1.迅速將凍存管投入到已經(jīng)預熱的水浴鍋中迅速解凍,，并要不斷的搖動，使管中的液體迅速融化,。
2.約1-2min后凍存管內(nèi)液體*溶解，取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,，再拿入超凈臺內(nèi),。
四.平衡離心：用架盤天平平衡后，放入離心機中3000r/min 離心3min
五.制備細胞懸液：
1.吸棄上清液,。
2.向離心管內(nèi)加入10ml培養(yǎng)液,，吹打制成細胞懸液。
六.細胞計數(shù)： 細胞濃度以5×105/ml為宜,。
七.培養(yǎng)細胞：
將復合細胞計數(shù)要求的細胞懸液分裝入培養(yǎng)瓶內(nèi),，將培養(yǎng)瓶放入37℃5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)2-4小時（或者24-48小時）后換液繼續(xù)培養(yǎng)培養(yǎng)，換液的時間由細胞情況而定,。
初學者易犯錯誤：
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃,。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導致傳熱不佳,，使融化時間延長,。
3.離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失,。
4.一次復蘇細胞過多,，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染,。
初學者易犯錯誤：
1水浴鍋未預熱或者未預熱到37℃,。
2.水浴鍋內(nèi)凍存管太多，導致傳熱不佳,，使融化時間延長,。
3.離心前忘記平衡，導致離心機損壞和細胞丟失,。
4.一次復蘇細胞過多,，忘記更換吸頭和吸管，導致細胞交叉污染,。
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