魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）定量檢測(cè)試劑盒（ELISA）

使用說明書

僅供科研使用,，不得用于醫(yī)學(xué)診斷,。

使用前仔細(xì)閱讀本說明書,。

用    途： 用于定量檢測(cè)魚血清,、血漿及相關(guān)液體樣本中膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的含量。

工作原理

本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）,，測(cè)定樣品中魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的水平,。向預(yù)先包被魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）抗體,，經(jīng)過溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的組分,，然后再加入底物A、B,，產(chǎn)生藍(lán)色,，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺與樣品中兔子魚膽囊收縮素/腸促胰酶肽（CCK）的濃度呈正相關(guān),。

試劑盒組成

注：標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為：500、250,、125,、62.5、31.2,、0pg/ml

需要而未提供的試劑和器材

1．  37℃恒溫箱,。

2．  標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3．  精密移液器及一次性吸頭

4．  蒸餾水,，

5．  一次性試管

6．  吸水紙

注意事項(xiàng)

1．  從2-8℃取出的試劑盒,，在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存,。

2．  各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,，以避免試驗(yàn)誤差

3．  建議所有標(biāo)準(zhǔn)品,、樣本都做雙份檢測(cè)。

4．  嚴(yán)格按照說明書的操作進(jìn)行,，試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

5．  為避免交叉污染,，要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

6．  不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。

7．  底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下,。

洗板方法

手工洗板方法：甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體；在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,，酶標(biāo)板朝下用力拍幾次,；將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi)，浸泡1-2分鐘,。根據(jù)需要,，重復(fù)此過程數(shù)次。

自動(dòng)洗板：如果有自動(dòng)洗板機(jī),，應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過程中

標(biāo)本要求

1．不能檢測(cè)含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性,。

2．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn),。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1．  分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)品孔,、待測(cè)樣品孔,。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl；在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）,。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外,。輕輕晃動(dòng)混勻,，37℃溫育60分鐘。

2．  棄去液體,，甩干,，每孔加滿稀釋后洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,，拍干,。

3．  每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl,，輕輕震蕩混勻,，37℃避光顯色15分鐘.

4．  取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μl,，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）,。

5．  測(cè)定：以空白孔調(diào)零,，在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值（OD值）,。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

6．  根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,，再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度,。也可以使用各種應(yīng)用軟件來計(jì)算,。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的，其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)：

準(zhǔn)備試劑,，樣品和標(biāo)準(zhǔn)品

加入準(zhǔn)備好的樣品,、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑，37℃反應(yīng)60分鐘

洗板5次,，加入顯色液A,、B，37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD值

計(jì)算

檢測(cè)范圍：7.8-500pg/ml,。

規(guī)格：    96T/盒

保存：    2-8℃

有效期：  6個(gè)月（2-8℃）,。