但是，由于細(xì)胞因子在體內(nèi)的含量甚微,，給細(xì)胞因子的檢測帶來困維,，細(xì)胞因子的檢測尚未在臨床診斷上廣泛開展，已知目前采用的細(xì)胞因子檢測方法均不完善,，且不同的檢測方法所得的結(jié)果差異較大,，給臨床診斷與治療帶來一定的困難。因此,，有必要了解各種檢測方法的特性及影響因素,。

 

目前，細(xì)胞因子生物學(xué)活性檢測和濃度測定方法主要有以下幾類

 

一.生物學(xué)檢測法

 

生物學(xué)檢測又稱生物活性檢測,，是根據(jù)細(xì)胞因子特定的生物活性而設(shè)計的檢測法,。由于各種細(xì)胞因子具有不同的活性，例如IL-2促進(jìn)淋巴細(xì)胞增殖,，TNF殺傷腫瘤細(xì)胞,，CSFci 激造血細(xì)胞集落形成，IFN保護細(xì)胞免受病毒攻擊,，因此選擇某一細(xì)胞因子*的生物活性,，即可對其進(jìn)行檢測。生物活性檢測法又可分為以下幾類：

 

1．細(xì)胞增殖法

 

許多細(xì)胞因子具有細(xì)胞生 zhang 因子活性,，特別是白細(xì)胞介素,，如IL-2 ci激t細(xì)胞生  zhang  、IL-3 ci 激肥大細(xì)胞生  zhang  ,、IL-6 ci 激漿細(xì)胞生  zhang  等,。利用這一特性，現(xiàn)已篩選出一些對特定細(xì)胞因子起反應(yīng)的細(xì)胞,，并建立了只依賴于某種因子的細(xì)胞系,，即依賴細(xì)胞株（簡稱依賴株）。這些依賴株在通常情況下不能存活,，只有在加入特定因子后才能增殖,。例如IL-2依賴株ctll-2在不含IL-2的培養(yǎng)基中很快死亡，而加入IL-2后則可右體外 zhang   期培養(yǎng),。在一定濃度范圍內(nèi),，細(xì)胞增殖與IL-2量呈正比,，因此通過測定細(xì)胞增殖情況（如使用3h-tdr摻入法、MTT法等）鑒定IL-2的含量,。除依賴株外,，還有一些短期培養(yǎng)的細(xì)胞，如胸腺細(xì)胞,、骨髓細(xì)胞,、促有絲分裂原ci 激后的淋巴母細(xì)胞等，均可作為靶細(xì)胞來測定某種細(xì)胞因子活性,。

 

2．靶細(xì)胞殺傷法

 

是根據(jù)某些細(xì)胞因子（如TNF）能在體外殺傷靶細(xì)胞而設(shè)計的檢測方法,。通常靶細(xì)胞多選擇體外zhang   期傳代的腫瘤細(xì)胞株，利用同位素釋放法或染料染色等方法判定細(xì)胞的殺傷率,。

 

3．細(xì)胞因子誘導(dǎo)的產(chǎn)物分析法

 

某些細(xì)胞因子可ci激特定細(xì)胞產(chǎn)生生物活性物質(zhì)，如IL-2,、IL-3誘導(dǎo)骨髓細(xì)胞合成胺,、IL-6誘導(dǎo)肝細(xì)胞合成α1-抗糜蛋白酶等。通過測定所誘生的相應(yīng)產(chǎn)物,，可反映細(xì)胞因子的活性,。

 

4．細(xì)胞病變抑制法

 

病毒可造成靶細(xì)胞的損傷，干擾素等則可抑制病毒所導(dǎo)致的細(xì)胞病變,，因此可利用細(xì)胞病變抑制法檢測這類因子,。

 

二、免疫學(xué)檢測法

 

細(xì)胞因子均為蛋白或多肽,，具有較強的抗原性,。隨著重組細(xì)胞因子的出現(xiàn)，可較方便地獲得細(xì)胞因子的特異性抗血清或單克隆抗體,，因此可利用抗原抗體特異性反應(yīng)的特性,，用免疫學(xué)技術(shù)定量檢測細(xì)胞因子。盡管細(xì)胞因子種類繁多,，只要獲得了針對某一因子的特異性抗體（包括多克隆抗體或單克隆抗體）均可采用相似的技術(shù)開展工作,。常用的方法包括ELISA、RIA及免疫印跡法,。目前,，幾乎所有常見細(xì)胞因子的檢測試劑盒均有商品供應(yīng)。此外還可利用酶標(biāo)或熒光標(biāo)記的抗細(xì)胞因子單克隆抗體,，原位檢測因子在細(xì)胞內(nèi)的合成及分布情況,，如近來來發(fā)展起來的細(xì)胞內(nèi)染色法和酶聯(lián)免疫斑點（ELISPOT）技術(shù)等。免疫學(xué)檢測法可直接測定樣品中特定細(xì)胞因子的含量（用ng/ml表示）,，為大規(guī)模檢測臨床病人血清中細(xì)胞因子的含量提供了方便,。本法僅測定細(xì)胞因子的抗原性，與該因子活性不一定相平行，因此要了解細(xì)胞因子的生物學(xué)效應(yīng),，必須結(jié)合生物學(xué)檢測法,。

 

三、分子生物學(xué)方法

 

這是一類利用細(xì)胞因子的基因探針檢測特定細(xì)胞因子基因表達(dá)的技術(shù),。目前所有*的細(xì)胞因子的基因均已克隆化,，故能較容易地得到某一細(xì)胞因子的cDNA探針或根據(jù)已知的核苷酸序列人工合成寡聚核苷酸探針。利用基因探針檢測細(xì)胞因子mRNA表達(dá)的方法多種多樣,，常使用斑點雜交,、Northern blot、逆轉(zhuǎn)錄PCR,，細(xì)胞或組織原位雜交等,。實驗的關(guān)鍵在于制備高質(zhì)量的核酸探針和獲得合格的待測物（提取的mRNA樣品或細(xì)胞/組織標(biāo)本）。核酸探針是指一段用放射性同位素或其他標(biāo)記物（如生物素,、地高辛等）標(biāo)記并與目的基因互補的DNA  片段或單鏈DNA,、RNA。根據(jù)其來源可分為cDNA探針,、寡核核苷酸探針,、基因組基因探針及DNA探針等。其中cDNA探針和人工合成寡核苷酸探針常用于斑點雜交及Northern blot,，而RNA探針因穿透性好更適用于原位雜交,。核酸探針技術(shù)的應(yīng)用已經(jīng)程序化，以cDNA探針為例主要包括：①質(zhì)粒DNA的提??；②靶DNA  片段的分離；③靶DNA  片段標(biāo)記,；④待測樣品mrna的提?。虎輼?biāo)記cDNA探針對待檢樣品的雜交,；⑥放射自顯影或顯色分析,。近年來出現(xiàn)的RT-PCR檢測特異性mRNA的方法也廣泛用于細(xì)胞因子研究領(lǐng)域。該法具有靈敏,、快速等優(yōu)點,，甚至從1～10個細(xì)胞中就可檢出其中的特異mRNA。

 

上述三種方法,，各有優(yōu)缺點,，可互相彌補，在實際應(yīng)用中,，可根據(jù)各自的實驗?zāi)康暮蛯嶒炇覘l件進(jìn)行選擇,。生物學(xué)檢測法比較敏感,，又可直接測定生物學(xué)功能，是zui可靠的方法,，適用于各種實驗?zāi)康?，是科研部門zui常用的技術(shù)，但需要  zhang   期培養(yǎng)依賴性細(xì)胞株,，檢測耗時  zhang  ,，步驟繁雜，影響因素多,，不容易熟練掌握,。免疫學(xué)檢測法比較簡單，迅速,，重復(fù)性好,，但所測定的只代表相應(yīng)細(xì)胞因子的量而不代表活性，同時敏感度也低于生物活性檢測法（約低10～100倍）,。分子生物學(xué)法只能檢測基因表達(dá)情況,，不能直接提供有關(guān)因子的濃度及活性等資料，主要用于機制探討,。在檢測細(xì)胞因子時，必須考慮到細(xì)胞因子的作用具有網(wǎng)絡(luò)性的特點,，人們需明確檢測方法所測定的細(xì)胞因子成分,，并考慮其抑制劑和可溶性受體的水平，將各種結(jié)合使用,，有可能得到較為可靠的結(jié)果,。