人寡樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒
本試劑僅供研究使用 標本:血清或血漿
試驗原理:
MOG-Ab試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知MOG-Ab濃度的標準品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將MOG-Ab和生物素標記的抗體同時溫育,。洗滌后,,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,,然后加入底物A、B,,和酶結(jié)合物同時作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中MOG-Ab的濃度呈比例關(guān)系,。
試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份(2-8℃保存) 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標板 1塊板(96T) 半塊板(48T) 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標準品:80IU/L 1瓶(0.6ml) 1瓶(0.3ml) 按說明書進行稀稀
空白對照 1瓶(1.0ml) 1瓶(0.5ml) 即用型
標準品稀釋緩沖液 1瓶(5ml) 1瓶(2.5ml) 即用型
生物素標記的抗MOG-Ab抗體 1瓶(6ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶(10ml) 1瓶(5.0ml) 即用型
洗滌緩沖液 1瓶(20ml) 1瓶(10ml) 按說明書進行稀釋
底物A 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
底物B 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
終止液 1瓶(6.0ml) 1瓶(3.0ml) 即用型
標本稀釋液 1瓶(12ml) 1瓶(6.0ml) 即用型
人寡樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒自備材料
1. 蒸餾水,。
2. 加樣器:5ul、10ul,、50ul,、100ul、200,、500ul,、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等,。
安全性
1. 避免直接接觸終止液和底物A,、B。一旦接觸到這些液體,,請盡快用水沖洗,。
2. 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3. 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。
操作注意事項
1. 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫,。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,,不可保存。
2. 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,,密封保存,,以免變質(zhì)。
3. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用,。
4. 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A,、B液時,,避免使用帶金屬部分的加樣器。
5. 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品,。
6. 洗滌酶標板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應(yīng)孔中吸水,。
7. 底物A應(yīng)揮發(fā),,避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,,有毒,。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8. 加入試劑的順序應(yīng)一致,,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣,。
9. 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作,。
樣品收集,、處理及保存方法
1、 血清-----操作過程中避免任何細胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿-----EDTA、檸檬酸鹽,、肝素血漿可用于檢測,。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
3,、 細胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎,。1000×g離心10分鐘,,取上清液
5、 保存------如果樣品不立即使用,,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,,避免反復冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,,檢測前先離心或過濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。
試劑的準備
1. 標準品:標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備,,不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進行:
80 IU/L (6號標準品) 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
40 IU/L (5號標準品) 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液
20 IU/L (4號標準品) 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液
10 IU/L (3號標準品) 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液
5.0 IU/L (2號標準品) 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液
2.5 IU/L (1號標準品) 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液
0 IU/L (空白對照) 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。
2. 洗滌緩沖液(50×)的稀釋:蒸餾水50倍稀釋,。
操作步驟
1. 使用前,,將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,,以免加樣時加入大量的氣泡,,產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個標準品和空白孔建議做復孔,。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定,能使用復孔的盡量做復孔,。標本用標本稀釋液1:1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標記的抗體,。蓋上膜板,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育1小時,。
4. 甩去孔內(nèi)液體,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,,甩去洗滌液,用吸水紙拍干,。重復此操作3次,。如果用洗板機洗滌,洗滌次數(shù)增加一次,。
5. 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,,輕輕振蕩混勻,37℃溫育30分鐘,。
6. 甩去孔內(nèi)液體,,每孔加滿洗滌液,,振蕩30秒,甩去洗滌液,,用吸水紙拍干,。重復此操作3次。如果用洗板機洗滌,,洗滌次數(shù)增加一次,。
7. 每孔加入底物A、B各50ul,,輕輕振蕩混勻,,37℃溫育10分鐘。避免光照,。
8. 取出酶標板,,迅速加入50ul終止液,加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果,。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值,。
人寡樹突膠質(zhì)細胞糖蛋白抗體ELISA 檢測試劑盒建議使用的實驗方案
標準品濃度(IU/L)
A 80 80 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 40 40 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 20 20 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 10 10 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 5.0 5.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 2.5 2.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
局限
6號標準品以上的結(jié)果為非線性的,根據(jù)此標準曲線無法得到的結(jié)果,。
試劑盒性能
1. 靈敏度:zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性:不與人其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復性:板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值:于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2,、以吸光度OD值為縱坐標(Y),,相應(yīng)的MOG-Ab標準品濃度為橫坐標(X),做得相應(yīng)的曲線,,樣品的MOG-Ab含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出濃度,。
3、檢測值范圍:0-80IU/L
4,、敏感度: 0.1 IU/L
人白介素4(IL-4)ELISA試劑盒 Human Interleukin 4,IL-4 ELISA試劑盒
人白介素3(IL-3)ELISA試劑盒 Human Interleukin 3,IL-3 ELISA試劑盒
人白介素2可溶性受體β鏈(IL-2sRβ )ELISA試劑盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA試劑盒
人白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-2 receptor,IL-2sRα ELISA試劑盒
人白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 Human Interleukin 2,IL-2 ELISA試劑盒
人白介素1α(IL-1α )ELISA試劑盒 Human Interleukin 1α,IL-1α ELISA試劑盒
人白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅱ,IL-1sRⅡ ELISA試劑盒
人白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒 Human soluble interleukin-1 receptor Ⅰ,IL-1sRⅠ ELISA試劑盒
人白介素16(IL-16)ELISA試劑盒 Human Interleukin 16,IL-16 ELISA試劑盒
人白介素13(IL-13)ELISA試劑盒 Human Interleukin 13,IL-13 ELISA試劑盒
人白介素12(IL-12/P70)ELISA試劑盒 Human Interleukin 12,IL-12/P70 ELISA試劑盒
人白介素12(IL-12/P40)ELISA試劑盒 Human Interleukin 12,IL-12/P40 ELISA試劑盒
人白介素11(IL-11)ELISA試劑盒 Human Interleukin 11,IL-11 ELISA試劑盒
人白介素10(IL-10)ELISA試劑盒 Human Interleukin 10,IL-10 ELISA試劑盒
人胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白4(IGFBP-4)ELISA試劑盒 Human insulin-like growth factors binding protein 4,IGFBP-4 ELISA試劑盒
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