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細(xì)胞爬片的免疫組化染色
1. 取出細(xì)胞爬片，迅速置入冷丙酮固定 20~30 分鐘,。
2. 蒸餾水浸泡 5 分鐘，2 次,。人類正常細(xì)胞株
3. 打孔液浸泡 5 分鐘,。
4. 蒸餾水浸泡 5 分鐘,，2 次。
注：第 3,、4 步僅用于檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)抗原,，檢測(cè)細(xì)胞膜抗原時(shí)不用。
5. 正常血清封閉：從染片缸中取出切片,，擦凈切片背面水分及切片正面組織周圍的水分 （保持組織呈濕潤(rùn)狀態(tài),）滴加正常山羊或兔血清 （與第二抗 體 同源動(dòng)物血清）處理,，37℃，15 分鐘,。
附：正常血清配制 （ 或按試劑盒規(guī)定的濃度配制）：按 1:20比例,，用 PBS 配制，每張切片需要量按 50μ+5μl （10%拋灑量） 計(jì)算,。
6. 滴加*抗體：用濾紙吸去血清,，不洗，直接滴加*抗體,，37℃ 2 小時(shí)（也可置于 4℃冰箱過(guò)夜） ,。
7. PBS：5 分鐘，2 次（置于搖床） ,。人類正常細(xì)胞株
8. 滴加生物素化的二抗,，37℃，40 分鐘,。
9. PBS：5 分鐘,，2 次（置于搖床） 。
10. 滴加三抗 （SAB 復(fù)合物） ,，37℃,，40 分鐘。
11. PBS：5 分鐘,，2 次（置于搖床） ,。
12. DAB 顯色，鏡下觀察,，適時(shí)終止（自來(lái)水沖終止） ,。
附：DAB 的配制① 儲(chǔ)備液（DAB 25mg/ml）的配制：DAB 250mg + PBS 10ml，待*溶解后分裝成 1ml,，100μl,，50μl ，20μ l 等,，-20℃,，凍存。② 工作液：DAB 儲(chǔ)備液 20μl + PBS 1000μl + 3% H2O2 5μl
13. 自來(lái)水（細(xì)水）充分沖洗。
14. 蘇木素復(fù)染,，室溫，30 秒,，自來(lái)水沖洗,。
15. 自來(lái)水沖洗返藍(lán)，15 分鐘,。
16. 梯度酒精脫水：80%,，2 分鐘 95%，2 分鐘 100%,，2 次,，5 分鐘。
17. 二甲苯透明：I ,，II （二甲苯）各 5 分鐘
18. 封片：加拿大樹(shù)膠（或中性樹(shù)膠）封片,。
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