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豬白細胞介素6(IL-6)酶聯免疫分析(ELISA)試劑盒使用說明書

來源:上海聯碩生物科技有限公司   2009年10月28日 15:57  

豬白細胞介素6IL-6酶聯免疫分析(ELISA

試劑盒使用說明書

本試劑盒僅供研究使用,。

藥品名稱:

通用名:豬白細胞介素6IL-6酶聯免疫分析試劑盒

使用目的:

本試劑盒用于測定豬血清,,血漿及相關液體樣本中白細胞介素6IL-6含量,。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中豬白細胞介素6IL-6水平。用純化的豬白細胞介素6抗體包被微孔板,,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入白細胞介素6,再與HRP標記的羊抗豬抗體結合,,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMBHRP酶的催化下轉化成藍色,,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的IL-6呈正相關,。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),,通過標準曲線計算樣品中豬白細胞介素6IL-6濃度。

試劑盒組成

1

20倍濃縮洗滌液

30ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標試劑

6ml×1

8

標準品(900ng/L

0.5ml×1

3

酶標包被板

12孔×3

9

標準品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2 

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1

標本要求

1.標本采集后盡早進行提取,,提取按相關文獻進行,,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,,可將標本放于-20保存,,但應避免反復凍融

2.不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性,。

操作步驟

1.         標準品的稀釋與加樣:在酶標包被板上設標準品孔10孔,,在*、第二孔中分別加標準品100μl,,然后在*,、第二孔中加標準品稀釋液50μl,混勻,;然后從*孔,、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三,、第四孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,,再各取50μl分別加到第五,、第六孔中,再在第五,、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul,,混勻,;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七,、第八孔中,,再在第七、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第七,、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,,再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl,,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,,濃度分別為600 ng/L,,400ng/L 200ng/L,,100ng/L,,50ng/L)。

2.         加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,,其余各步操作相同),、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍),。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,,輕輕晃動混勻,。

3.         溫育:用封板膜封板后置37溫育30分鐘。  

4.         配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.         洗滌:小心揭掉封板膜,,棄去液體,,甩干,每孔加滿洗滌液,,靜置30秒后棄去,,如此重復5次,拍干,。

6.         加酶:每孔加入酶標試劑50μl,,空白孔除外。

7.         溫育:操作同3,。

8.         洗滌:操作同5,。

9.         顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,,37避光顯色15分鐘.

10.     終止:每孔加終止液50μl,,終止反應(此時藍色立轉黃色)。

11.     測定:以空白空調零,,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值),。 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

 

計算

  以標準物的濃度為橫坐標,,OD值為縱坐標,,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的OD值由標準曲線查出相應的濃度,;再乘以稀釋倍數,;或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,,即為樣品的實際濃度,。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未用完,,板條應裝入密封袋中保存,。

2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,,洗滌時不影響結果,。

3.各步加樣均應使用加樣器,并經常校對其準確性,,以避免試驗誤差,。一次加樣時間控制在5分鐘內,如標本數量多,,推薦使用排槍加樣,。

4.  請每次測定的同時做標準曲線,做復孔,。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值),,請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定,計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5),。

5.  封板膜只限一次性使用,,以避免交叉污染。

6.底物請避光保存,。

7.嚴格按照說明書的操作進行,,試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.

8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用,。

10. 如與英文說明書有異,,以英文說明書為準。

檢測范圍:

40ng/L -800ng/L

規(guī)格:

96人份/

保存條件及有效期

1.試劑盒保存:,;2-8,。

2.有效期:6個月

 

 

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