研究人員改進(jìn)從酵母中提取gDNA的方法

背景：

細(xì)胞壁是快速裂解酵母細(xì)胞的主要障礙。從酵母細(xì)胞中制備gDNA的傳統(tǒng)方法包括使用破壁酶和玻璃珠,，之后通過去垢劑裂解細(xì)胞,，并利用酚-氯仿提取gDNA。在分析大量樣品時,，這些方法相當(dāng)耗時,，也相對較貴。

在快速分析時,，也可以通過反復(fù)凍融裂解細(xì)胞,。盡管這種方法相對較快，但是在氯仿抽提之后需要將樣品轉(zhuǎn)移至新的管中,，這對于大量樣品的同時抽提就不太方便。另外,，還有一種更為簡單的SDS處理方法,。不過，似乎產(chǎn)量較低,，結(jié)果重復(fù)性不太好,。

方法改進(jìn)：

由于酵母轉(zhuǎn)化實驗中常常使用醋酸鋰（LiOAc）來弱化細(xì)胞壁，故我們決定將它與SDS結(jié)合,，來開發(fā)一種從酵母中提取gDNA的快速,、方法。

我們從YPD平板上挑了8個釀酒酵母的單克隆,，重懸在100 µL 200 mM LiOAc和1% SDS的溶液中,，并在70°C孵育15分鐘,。孵育之后，加入300 µL 96%乙醇,，渦旋振蕩混合樣品,，并以15000x g離心3分鐘，收集DNA,。將DNA沉淀溶解在100 µL TE中,，通過短暫離心（15000x g，1分鐘）去除細(xì)胞碎片,，之后取1 µL上清進(jìn)行PCR,。

我們在不同的反應(yīng)中擴(kuò)增了兩個不同的gDNA片段，大小分別為489 bp和2383 bp,，并在0.9%的瓊脂糖凝膠中分析了PCR產(chǎn)物,。我們發(fā)現(xiàn)，通過LiOAc-SDS方法制備的所有樣品都能擴(kuò)增出兩個片段,。

結(jié)論：

我們開發(fā)出一種從酵母中提取gDNA的快速可靠方法,，適用于3500 bp以下的DNA片段的擴(kuò)增。整個過程可在15分鐘內(nèi)完成,，不需要更換離心管,，相當(dāng)方便。液體和固體培養(yǎng)基的細(xì)胞都可使用,。此方法適用于酵母重組子的快速篩選或酵母的常規(guī)基因分型,。

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