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中藥一般質(zhì)量控制方法分析

來源:上海曼賢經(jīng)貿(mào)有限公司   2009年10月24日 14:35  

1 水分測(cè)定法

中藥的水分含量多少,,是貯藏過程中保證質(zhì)量的中藥標(biāo)志,,若水分超過一定的限度,,就會(huì)引起霉變蟲蛀或化學(xué)成分分解變質(zhì),,水分測(cè)定就是為了保證中藥水分不因超過限度而霉變蟲蛀和變質(zhì),。
常用水分測(cè)定方法有烘干法,、甲苯法、卡氏法,、氣相色譜法,,烘干法適用于不揮發(fā)性成分的中藥;甲苯法適用于含揮發(fā)性成分的中藥,;卡氏法(卡法—費(fèi)休滴定法)屬非水溶液氧化還原滴定方法之一,,具有迅速準(zhǔn)確用量小的特點(diǎn),;氣相色譜法測(cè)定水分具有靈敏度高、快速,、不受環(huán)境濕度影響等優(yōu)點(diǎn),。(具體操作可參考藥典)
 
2 灰分測(cè)定法
        生藥灰分的來源,包括生藥本身經(jīng)過灰化后的不揮發(fā)性的無機(jī)鹽,,以及生藥表面附著的不揮發(fā)性無機(jī)鹽類,,即總灰分。同一種生藥,,在無外來摻雜物時(shí),,一般都有一定的總灰分含量范圍,規(guī)定生藥的總灰分限度.對(duì)于保證生藥的品質(zhì)和潔凈程度,有一定的意義,。如果總灰分超過一定限度,,說明摻有外來無機(jī)物。有的生藥本身含有的無機(jī)物差異較大,,尤其是含多量草酸鈣的生藥,。測(cè)定總灰分有時(shí)不足以說明外來無機(jī)物的存在。還需要測(cè)定酸不溶性成分,,因?yàn)樯幈旧硭臒o機(jī)鹽類(包括鈣鹽)大多可溶于稀鹽酸中,,而來自泥沙等的硅酸鹽類在酸中不溶解。因此測(cè)定酸不溶性灰分,,能較準(zhǔn)確地表明生藥中泥沙的摻雜與否及其含量,。主要方法有灰分測(cè)定方法、等離子體灰化法,。
 
3 浸出物的測(cè)定
        浸出物的測(cè)定適用于有效成分尚不清楚或尚無確切的定量測(cè)定方法的生藥,。可根據(jù)生藥中已知成分的溶解性質(zhì)選擇適當(dāng)?shù)娜軇?,如水,、一定濃度的乙醇、乙醚作浸出物的含量測(cè)定,,這樣可概略地了解生藥的質(zhì)地,。一般分三大類:水溶性浸出物測(cè)定法用于測(cè)定樣品中能溶于水的成分的含量、醇溶性浸出物測(cè)定法用規(guī)定濃度的乙醇代替蒸餾水為溶劑,,按水溶性浸出物測(cè)定法進(jìn)行測(cè)定,、醚溶性浸出物測(cè)定法用于測(cè)定樣品中醚溶性成分的含量。
 
4 揮發(fā)油的測(cè)定
     揮發(fā)油是中藥中一類有效成分,??衫闷淠芘c水蒸氣一起蒸餾出來的性質(zhì),在特制的蒸餾器內(nèi)測(cè)定其含量.
(1)揮發(fā)油的常量測(cè)定有以下三種方法:
         ① 甲法 本法適用于測(cè)定比重在1.0以下的揮發(fā)油。例如,莪術(shù)中所含揮發(fā)油的含量測(cè)定:
        儀器裝置如圖3-5,。A為1000ml的硬質(zhì)圓底燒瓶,,上接揮發(fā)油測(cè)定器B,B的上端連接回流冷凝管C,。以上各部分均用玻璃磨口連接,。測(cè)定器B應(yīng)具有0.1ml的刻度。全部儀器應(yīng)充分洗凈,,并檢查接合部分是否嚴(yán)密,,以防止油分逸出。
         ② 乙法 本法適用于測(cè)定比重在1.0以上的揮發(fā)油,。儀器裝置和取供試樣量如甲法,。
取水約30Oml與玻璃珠數(shù)粒,置燒瓶中,,連接揮發(fā)油測(cè)定器,。自測(cè)定器上端添加水使充滿刻度部分,并溢流入燒瓶中為止,,再用移液管加入二甲苯 lml,。然后連接回流冷凝管。將燒瓶內(nèi)容物加熱至沸騰,,并繼續(xù)蒸餾,,其速度以保持冷凝管的中部呈冷卻狀態(tài)為度。30分鐘后,,停止加熱,,放置15分鐘以上。讀取二甲苯的容積,。然后照甲法操作,。讀取已溶有揮發(fā)油的二甲苯容積,從中減去二甲苯量,,即為揮發(fā)油量,,再換算成供試樣中含有揮發(fā)油的百分?jǐn)?shù)。
 ③ 丙法 此法是在前兩種方法基礎(chǔ)上改進(jìn)了的一種測(cè)定方法,。所采用的裝置既可測(cè)定比重大于l的揮發(fā)油,,也可測(cè)定比重小于l的揮發(fā)油,測(cè)定中不需使用二甲苯,。裝置由下列部分組成(見圖3-6),。
5       皂苷的含量測(cè)定
    皂苷類成分是一類化學(xué)結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜的化合物,,在含量測(cè)定中雖然可用多種方法,,但靈敏度總不及其它類型成分,如黃酮,、蒽醌類化合物,。檢測(cè)難度也較其他成分為高,。除少數(shù)皂苷(如甘草酸、遠(yuǎn)志皂苷等)外大多數(shù)皂苷紫外區(qū)無明顯吸收,。因此分光光度法測(cè)定皂苷含量不大多見,,皂苷的含量測(cè)定中,以色譜法占主導(dǎo)地位(包括薄層色譜,、液相色譜等)現(xiàn)將皂苷含量測(cè)定所用的一般方法簡述如下:
(1) 分光光度法
       皂苷類顏色反應(yīng)專屬性較差而反應(yīng)比較靈敏,、方法簡便、易行,。常用的顯色劑有濃硫酸,、高氯酸、硫酸一醋酐,、香草醛一硫酸,、香草醛一高氯酸等。皂苷類與顯色劑反應(yīng)后一般在紫外區(qū)或可見光區(qū)有zui大吸收,,可在其zui大吸收部位測(cè)吸收度以進(jìn)行含量分析,。
(2) 薄層色譜一光密度法
          先將皂苷制劑的提取液經(jīng)薄層分離后再加顯色劑顯色,測(cè)定,。
(3) 氣相色譜法
         先將皂苷水解后的皂苷元通過酯化或?;磻?yīng)使其生成可以氣化的酯類或其他物質(zhì),在氣相色譜儀上進(jìn)行定量,。
(4) 液相色譜法
         根據(jù)測(cè)定皂苷的結(jié)構(gòu)及性質(zhì),,選擇適宜的色譜柱及流動(dòng)相,對(duì)皂苷進(jìn)行分離,、定量,。
(5) 酸堿滴定法
         一些帶有羧基的皂苷如甘草皂苷可以此法測(cè)定。
         除以上5種常用的測(cè)定方法外,,紅外光譜定量,、液滴逆流色譜法、薄層色譜掃描法,、極譜法,、庫侖滴定法、非水滴定法,、電位滴定法等用于皂苷的含量測(cè)定,,也見諸報(bào)導(dǎo)。
6 總生物堿的含量測(cè)定
        生物堿是一類含氮的堿性天然有機(jī)物,,大多具有復(fù)雜的氮環(huán)結(jié)構(gòu),,無化學(xué)活性和顯著的生理活性,許多中藥中含有生物堿類成分,如黃連,、黃柏,、烏頭、附子,、苦參,、山豆根、麻黃,、馬錢子等,,相當(dāng)多的生物堿已被證明是許多中藥和中藥制劑中重要的活性成分或?yàn)槎拘猿煞郑飰A類成分在中藥及中藥制劑研究領(lǐng)域占有十分重要的地位,。 
        目前,,應(yīng)用于生物堿定量的方法較多,有早期常用的重量法,、容量法,、比色法的擴(kuò)展至近年來多用的分光光度法、薄層色譜掃描法,、液相色譜法,、氣相色譜法等。
        重量法測(cè)定中藥制劑中生物堿,,多為測(cè)定其總生物堿的含量,,一般分直接稱重和沉淀稱重法兩種。容量法測(cè)定生物堿含量的常用方法有水溶液酸堿滴定法,、非水酸堿滴定法,、兩相滴定法、絡(luò)合滴定法和沉淀容量法,。該法操作方便準(zhǔn)確,,屬常量分析。比色法是根據(jù)生物堿結(jié)構(gòu)的特征,,利用生物堿本身具有的顏色或與顯色劑反應(yīng)使zui大吸收紅移至可見光區(qū),,且吸收度與生物堿含量在一定范圍內(nèi)呈線性關(guān)系而進(jìn)行定量,常用的有雷氏鹽比色法和酸性染料比色法,,用紫外分光光度法測(cè)定生物堿含量占的比重越來越大,,僅《中國藥典》一部涉及紫外測(cè)定生物堿含量的藥材就達(dá)十一種之多,薄層色譜掃描法,,液相色譜法,、氣相色譜法也可用于生物堿的測(cè)定。
 
7 總蒽醌的含量測(cè)定
       蒽醌類是一類生物活性物質(zhì),。蒽醌類化合物在植物界分布很廣,。
       蒽醌類化合物的含量測(cè)定有重量法,、容量法、分光法,、熒光法、色譜法,、極譜法等,。以分光法應(yīng)用且經(jīng)典。隨分析技術(shù)的現(xiàn)代化,,色譜法目前在中藥質(zhì)量分析中占有重要位置,,特別是薄層色譜掃描和液相色譜法。
       分光法多利用蒽醌類化合物在堿性溶液中生成較為穩(wěn)定的紅色,,在一定濃度范圍內(nèi),,吸收度與濃度成正比,以此可以對(duì)蒽醌進(jìn)行定量,。
       有時(shí)需要測(cè)定結(jié)合蒽醌的含量,,因?yàn)榻Y(jié)合蒽醌與游離蒽醌具有不同生理活性。此時(shí),,可首先用有機(jī)溶劑將游離蒽醌提出,,測(cè)定含量,再取另一份提取液用酸水解,,由有機(jī)溶劑提出蒽醌,,進(jìn)行測(cè)定。此時(shí)測(cè)出的是總蒽醌,。
結(jié)合蒽醌=總蒽醌一游離蒽醌
        又因中藥中蒽醌類化合物有酸型(如大黃酸型),、還原型(如蒽酮、蒽酚等),,它們的結(jié)構(gòu)差異導(dǎo)致生理活性的差別也很大,。所以有些國家藥典不僅測(cè)定制劑中的總蒽醌、結(jié)合蒽醌和游離蒽醌的量,,而且測(cè)定氧化型蒽醌衍生物(蒽醌),、還原型蒽醌衍生物(蒽酮、蒽酚),、二蒽酮,、酸性蒽醌衍生物(大黃酸類化合物)的含量。
8 總蒽醌含量測(cè)定
        黃酮類化合物在植物界分布相當(dāng)普遍,,目前已發(fā)現(xiàn)的天然黃酮類化合物有2000多種,,研究中藥黃酮類成分的理化性質(zhì)、分析方法,、生理活性,,并觀察其醫(yī)療用途是目前中藥研究的一項(xiàng)重要內(nèi)容,。
        黃酮類成分的含量測(cè)定方法,據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道有重量法,、非水滴定法,、絡(luò)合滴定法、安培滴定法,、庫侖滴定法,、可見紫外分光光度法、極譜法,、薄層色譜掃描法,、氣相色譜法,液相色譜法等多種定量方法,。這些方法大多用于純成分的研究,,而中藥及中藥制劑中化學(xué)組成復(fù)雜干擾物質(zhì)多,難以直接應(yīng)用,。一般需經(jīng)提取分離純化后測(cè)定其含量,,目前應(yīng)用較多的主要有:可見分光光度法、紫外分光光度法,、薄層色譜掃描法,、液相色譜法等。極譜法,、庫侖滴定法等也有應(yīng)用,。而《中國藥典》使用了可見一紫外分光光度法、薄層色譜掃描法及液相色譜法等方法進(jìn)行黃酮的含量測(cè)定,。
        黃酮類化合物在中藥材中以苷或苷元的形式存在,,二者極性不同,可分別采用不同的方法提取,。黃酮苷類一般用 50%~ 70%乙醇提取,,苷元?jiǎng)t多用甲醇、乙醚或稀堿水溶液提取,,常用冷漬法加熱回流提取,,如果提取液中所含成分不太復(fù)雜,雜質(zhì)含量不高,,可直接將提取液過濾,,進(jìn)而進(jìn)行含量測(cè)定?;蚪?jīng)濃縮調(diào)整一定體積后,,進(jìn)行薄層色譜分離,并根據(jù)各斑點(diǎn)所對(duì)應(yīng)的組分測(cè)定其含量,。如果樣品雜質(zhì)較多,,影響層析和測(cè)定,,則可先用石油醚、乙醚等除去葉綠素,、脂肪等,。還可利用堿溶酸沉法,處理純化樣品后備用,。若溶劑提取法不能達(dá)到分析方法對(duì)樣品純度的要求時(shí),,還可采用鉛鹽沉淀法或聚酰胺層析法進(jìn)行純化后再測(cè)定。
9 重金屬,、毒害元素的檢測(cè)
9.1 重金屬的檢測(cè)
        重金屬系指在實(shí)驗(yàn)條件下能與硫代乙酰胺或硫化鈉作用顯色的金屬雜質(zhì),,如銀,、鉛,、汞、鎘,、銅,、鉍、銻,、錫,、鎳、鈷,、鋅等,。中藥制劑在生產(chǎn)過程中長時(shí)間接觸金屬器皿,或用鉛鹽沉淀法等方法制備過程中,,都有可能使制劑中重金屬含量超過規(guī)定限度,,影響藥物的穩(wěn)定性和安全性,所以應(yīng)作重金屬*,。由于在藥品生產(chǎn)中遇到鉛的機(jī)會(huì)較多,,而且鉛易引起中毒,故檢查時(shí)以鉛為代表,。
         實(shí)驗(yàn)條件主要指溶液的pH直接影響重金屬與顯色劑反應(yīng)是否*,,從而影響測(cè)定的準(zhǔn)確度。能溶于水,、稀酸及乙醇的藥物,,一般在酸性條件下以硫代乙酰胺為顯色劑進(jìn)行檢查,如用硫化鈉試液,,容易分解析出乳硫,,引起渾濁而影響比色。在pH3.0—3.5,,硫代乙酰胺水解產(chǎn)生硫化氫,,可與重金屬離子生成有色硫化物的均勻混懸液,。硫代乙酰胺的優(yōu)點(diǎn)是無惡臭,濃度易控制,。 在堿性溶液中,,則用硫化鈉試劑作為顯色劑,凡溶于堿不溶于稀酸的藥物,,或在稀酸中產(chǎn)生沉淀的藥物,,均在堿性溶液中以硫化鈉試液作為顯色劑。檢查方法采用目視比色法,,將檢品溶液在弱酸性條件下加硫代乙酰胺,,或在堿性條件下加硫化鈉,使與微量的重金屬雜質(zhì)作用生成棕色或黑色(以鉛為代表),,與一定量標(biāo)準(zhǔn)鉛溶液經(jīng)同法處理后所呈顏色進(jìn)行比較,,判斷檢品中重金屬雜質(zhì)的*是否符合規(guī)定。
9.2 毒害元素檢測(cè):
        (1) 砷鹽檢查法:雄黃等藥其稀酸浸出液中含有可溶性砷,,雖含量甚微,,但砷在體內(nèi)積蓄性很強(qiáng),超過一定量會(huì)引起中毒,,故進(jìn)行砷鹽檢查具有實(shí)際意義,。一般用古蔡發(fā)即砷斑法檢查砷鹽,該方法是限度半定量方法,,精密度差,。而二乙氨基二硫代甲酸銀比色法(DDC-Ag比色法)用于中藥含砷量檢測(cè)則有操作簡便,靈敏度較高等特點(diǎn),。
         (2) 可溶性汞鹽檢查法
         中藥中微量有害金屬汞的檢測(cè),,一般用原子吸收光譜儀和汞元素測(cè)定儀測(cè)定,也有用雙硫腙法測(cè)定,。
10 農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)
        為了防治栽培的藥材遭受病蟲危害,,提高藥材的產(chǎn)量,施用農(nóng)藥是有效措施之一,,但有些農(nóng)藥如有機(jī)氯的半衰期較長,,殘留在藥用植物上,zui后富集于人體的組織中,,引起神經(jīng)絮亂,,肝臟受損等疾病發(fā)生,有機(jī)磷農(nóng)藥目前施用得較為普遍,,滲入藥用植物體內(nèi)后,,能保持較長的時(shí)間,若在農(nóng)藥的有效期采收藥用植物,,則藥材中就可能有農(nóng)藥殘留,,因此農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)是目前人們十分關(guān)注的問題,。
10.1. 有機(jī)磷農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)
        有機(jī)磷農(nóng)藥種類很多,如樂果殺蟲靈(乙酰甲胺麟),、內(nèi)吸磷(1059),、三硫磷、1240,、M-74,、3911、4049,、辛硫磷,、DDVP等,其中樂果,,殺蟲靈,,1059(內(nèi)吸磷)較為常用,常用剛果紅法或紙上斑點(diǎn)法進(jìn)行測(cè)定,,含量測(cè)定則用氣相色普法,。
10.2     有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)
        由于有機(jī)氯農(nóng)藥使用歷史較長,,使用量較大再加上穩(wěn)定性,,造成對(duì)自然環(huán)境和人體的嚴(yán)重污染已引起人們的廣泛注意。有機(jī)氯農(nóng)藥殘留量的測(cè)定,,主要的是測(cè)定六六六和滴滴涕,。由于有些地區(qū)還使用有機(jī)氯農(nóng)藥,因此對(duì)艾氏劑,,荻氏劑,,七氯的農(nóng)藥的殘留量有時(shí)要進(jìn)行測(cè)定,一般用焰色檢查,,亞鐵氰化銀試紙法,,比濁法,薄層色譜法,,氣相色譜法進(jìn)行測(cè)定,。
10.3     甲基托布津,多菌靈的檢測(cè)
        甲基托布津被甲醇從樣品中提出后,,在強(qiáng)酸性(pH 1—2)的溶液中,,再經(jīng)二氯甲烷純化,可用紫外分光光度法進(jìn)行定量測(cè)定,,純化后的甲基托布津由閉環(huán)反應(yīng)轉(zhuǎn)變?yōu)槎嗑`,,便可直接測(cè)定其吸光度而定量。

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