人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA 檢測(cè)試劑盒
本試劑僅供研究使用  標(biāo)本：血清或血漿

試驗(yàn)原理：
NF-κB-P65試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（ELISA）.已知NF-κB-P65濃度的標(biāo)準(zhǔn)品,、未知濃度的樣品加入微孔酶標(biāo)板內(nèi)進(jìn)行檢測(cè),。先將NF-κB-P65和生物素標(biāo)記的抗體同時(shí)溫育,。洗滌后,，加入親和素標(biāo)記過(guò)的HRP,。再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,，然后加入底物A、B,，和酶結(jié)合物同時(shí)作用,。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中NF-κB-P65的濃度呈比例關(guān)系,。

試劑盒內(nèi)容及其配制
試劑盒成份（2-8℃保存） 96孔配置 48孔配置 配制
96/48人份酶標(biāo)板 1塊板（96T） 半塊板（48T） 即用型
塑料膜板蓋 1塊 半塊 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品：8.0umol/L 1瓶（0.6ml） 1瓶（0.3ml） 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀稀
空白對(duì)照 1瓶（1.0ml） 1瓶（0.5ml） 即用型
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋緩沖液 1瓶（5ml） 1瓶（2.5ml） 即用型
生物素標(biāo)記的抗NF-κB-P65抗體 1瓶（6ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
親和鏈酶素-HRP 1瓶（10ml） 1瓶（5.0ml） 即用型
洗滌緩沖液 1瓶（20ml） 1瓶（10ml） 按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
底物B 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
終止液 1瓶（6.0ml） 1瓶（3.0ml） 即用型
標(biāo)本稀釋液 1瓶（12ml） 1瓶（6.0ml） 即用型

人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA 檢測(cè)試劑盒自備材料
1． 蒸餾水,。
2． 加樣器：5ul,、10ul,、50ul、100ul,、200,、500ul、1000ul,。
3． 振蕩器及磁力攪拌器等,。

安全性
1． 避免直接接觸終止液和底物A、B,。一旦接觸到這些液體,，請(qǐng)盡快用水沖洗。
2． 實(shí)驗(yàn)中不要吃喝、抽煙或使用化妝品,。
3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份,。

操作注意事項(xiàng)
1． 試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫,。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,，不可保存。
2． 實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,，密封保存,，以免變質(zhì)。
3． 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好,。不同批號(hào)的試劑不要混用,。保質(zhì)前使用。
4． 使用一次性的吸頭以免交叉污染,，吸取終止液和底物A,、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器,。
5． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液,。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。
6． 洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水,。
7． 底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子,。底物B對(duì)光敏感,，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,，有毒,。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
8． 加入試劑的順序應(yīng)一致,，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣,。
9． 按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作,。

樣品收集,、處理及保存方法
1、 血清-----操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離,。
2,、 血漿-----EDTA,、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè),。1000×g離心30分鐘去除顆粒,。
3、 細(xì)胞上清液---1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物,。
4,、 組織勻漿-----將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,，取上清液
5,、 保存------如果樣品不立即使用，應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,，避免反復(fù)冷凍,。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,，檢測(cè)前先離心或過(guò)濾,。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍,。

試劑的準(zhǔn)備
1． 標(biāo)準(zhǔn)品：標(biāo)準(zhǔn)品的系列稀釋?xiě)?yīng)在實(shí)驗(yàn)時(shí)準(zhǔn)備,，不能儲(chǔ)存。稀釋前將標(biāo)準(zhǔn)品振蕩混勻,。稀釋比例按下表中進(jìn)行：
8.0 umol/L （6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul,。
4.0 umol/L （5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
2.0 umol/L （4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
1.0 umol/L （3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.5 umol/L （2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0.25 umol/L （1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品） 100ul的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入100ul的標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液
0 umol/L （空白對(duì)照） 原始濃度不用稀釋直接加入50ul。

2． 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋,。

操作步驟
1． 使用前,，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫,，以免加樣時(shí)加入大量的氣泡,，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2． 根據(jù)待測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔,。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔,。標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。
3． 加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測(cè)樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi),。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板,，輕輕振蕩混勻,，37℃溫育1小時(shí),。
4． 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液,，振蕩30秒,，甩去洗滌液，用吸水紙拍干,。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次,。
5． 每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘,。
6． 甩去孔內(nèi)液體,，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒,，甩去洗滌液,，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次,。如果用洗板機(jī)洗滌,，洗滌次數(shù)增加一次。
7． 每孔加入底物A,、B各50ul,，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘,。避免光照,。
8． 取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液,，加入終止液后應(yīng)立即測(cè)定結(jié)果,。
9． 在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

人核轉(zhuǎn)錄因子κB-P65ELISA 檢測(cè)試劑盒建議使用的實(shí)驗(yàn)方案
 標(biāo)準(zhǔn)品濃度（umol/L） 
A 8.0 8.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
B 4.0 4.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
C 2.0 2.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
D 1.0 1.0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
E 0.5 0.5 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
F 0.25 0.25 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
G 0 0 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品
H 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品 樣品

局限
6號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的,，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無(wú)法得到的結(jié)果,。

試劑盒性能
1. 靈敏度：zui小的檢測(cè)濃度小于1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性,。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990,。
2. 特異性：不與人其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi),、板間變異系數(shù)均小于10%,。

結(jié) 果 判 斷 與 分 析
1、儀器值：于波長(zhǎng)450nm的酶標(biāo)儀上讀取各孔的OD值

2,、以吸光度OD值為縱坐標(biāo)（Y）,，相應(yīng)的NF-κB-P65標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)（X）,，做得相應(yīng)的曲線，樣品的NF-κB-P65含量可根據(jù)其OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線換算出相應(yīng)的濃度,。

3,、檢測(cè)值范圍：0-8.0umol/L

4、敏感度： 0.01 umol/L
人干細(xì)胞因子/肥大細(xì)胞生長(zhǎng)因子（SCF/MGF）ELISA試劑盒 Human Stem cell factor/mast cell growth factor,SCF/MGF ELISA試劑盒
人可溶性CD40配體（sCD40L）ELISA試劑盒  Human Soluble Cluster of differentiation 40 ligand,sCD40L ELISA試劑盒
人可溶性CD30配體（sCD30L）ELISA試劑盒  Human Soluble Cluster of differentiation 30 ligand,sCD30L ELISA試劑盒
人正常T細(xì)胞表達(dá)和分泌因子（RANTES/CCL5）ELISA試劑盒  Human regulated on activation in normal T-cell expressed and secreted,RANTES ELISA試劑盒
人P選擇素（P-Selectin/CD62P/GMP140）ELISA試劑盒 Human P-Selectin/CD62P/GMP140 ELISA試劑盒
人血血小板衍生生長(zhǎng)因子AB（PDGF-AB）ELISA試劑盒 Human Plaet-Derived Growth Factor AB,PDGF-AB ELISA試劑盒
人血血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒 Human Plaet-Derived Growth Factor Soluble Receptor α,PDGFsR-α ELISA試劑盒
人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子4（NT-4）ELISA試劑盒 Human Neurotrophin 4,NT-4 ELISA試劑盒
人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3（NT-3）ELISA試劑盒 人神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子3（NT-3）ELISA試劑盒
人的神經(jīng)生長(zhǎng)因子（NGF）ELISA試劑盒  Human Nerve growth factor,NGF ELISA試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3β（MIP-3β/ELC/CCL19）ELISA試劑盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3β,MIP-3β ELISA試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白3α（MIP-3α/CCL20）ELISA試劑盒 Human Macrophage Inflammatory Protein-3α,MIP-3α ELISA試劑盒
人巨噬細(xì)胞炎性蛋白1β（MIP-1β/CCL4）ELISA試劑盒  Human Macrophage Inflammatory Protein-1β,MIP-1β ELISA試劑盒
人黏膜地址素細(xì)胞黏附分子（MAdCAM-1）ELISA試劑盒 Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA試劑盒
人β干擾素（IFN-β/IFNB）ELISA試劑盒 Human Interferon β,IFN-β/IFNB ELISA試劑盒
人可溶性CD38（sCD38）ELISA試劑盒 Human Soluble Cluster of differentiation 38,sCD38 ELISA試劑盒