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大鼠腦組織石蠟切片的操作步驟
在取材前一般要對(duì)大鼠進(jìn)行灌注,。
石蠟的過程如下：
1. 前固定：腦組織經(jīng)心臟灌流進(jìn)行前固定——麻醉動(dòng)物,，暴露心臟,，從左心室灌注生理鹽水或0.1M PBS幾百毫升（一般為動(dòng)物體積2－3倍）,，同時(shí)在右心房剪一口,。然后再灌注幾百體積4％多聚甲醛等固定液,。
2. 后固定：取腦,，置于固定液中后固定液24小時(shí)。
3. 脫水: 從低濃度酒精到高濃度酒精依次：（注意：高濃度酒精時(shí)間不能太長(zhǎng),，否則組織易碎,。）70%酒精可過夜 80%酒精2小時(shí) 95%酒精1小時(shí)兩次 100%酒精1小時(shí)兩次。（50%酒精6小時(shí),70%4小時(shí),80%4小時(shí),90%過夜,，95%1.5小時(shí)x 4次 無水1.5小時(shí)x4次）
4. 透明: 1：1的酒精和二甲苯1小時(shí) 常用二甲苯, 一般浸泡30－45min即可,。（二甲苯透明 10分x4次）
5. 浸蠟: 組織經(jīng)透明后放入熔化的軟蠟（熔點(diǎn)為52－54℃）內(nèi)，2小時(shí),；然后入硬蠟（熔點(diǎn)56－58℃）2－3小時(shí),。 6.包埋: 將熔化的石蠟倒入包埋框再將組織塊放入，放入時(shí)不能有氣泡.（ 注意：1.包埋面必須平整,，否則不好切片,！2.建議石蠟反復(fù)融化幾次,，以使其變得更加致密，便于以后切片,。）
7.切片：組織厚度2mm 建議：大鼠腦大,，若不影響實(shí)驗(yàn)可切開。
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灌注方法一般是經(jīng)升主動(dòng)脈灌注,，先用生理鹽水（37℃）快速灌注5min（60 ml）左右以移除血液，或者先用冰冷pbs灌注,，針頭扎在左心室,，右心房剪開，直到肝臟發(fā)白（防止殘留的血液導(dǎo)致非特異性染色）,。然后用4％多聚甲醛0.1M磷酸緩沖液（pH 7.4）（4℃）400ml－500ml灌注固定,，直到動(dòng)物的肝臟發(fā)硬，尾巴僵直,。完成灌注,。動(dòng)物放置4度冰箱保存2小時(shí)，然后取腦,，繼續(xù)保存在4%多聚甲醛/pbs中4度冰箱過夜（不要超過24h）,，第二天轉(zhuǎn)移至30%蔗糖脫水至沉低。然后做病理試驗(yàn)（中性福爾馬林固定24h內(nèi)脫水石蠟包埋）,。
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