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疾病診斷,、細(xì)菌鑒定,，關(guān)鍵在鑒定毒素。從材料中如能迅速檢出毒素為,，檢出速度快，治療預(yù)防能及時(shí)。從癥狀、流行病學(xué)懷疑肉毒癥后,，應(yīng)先千方百計(jì)地在極短時(shí)期內(nèi)證明檢材中是否有肉毒梭菌毒素，搶時(shí)間救人,。在設(shè)法證明毒素存在的同時(shí),，進(jìn)行細(xì)菌分離、鑒定及產(chǎn)毒能力測(cè)定,。
（1）檢驗(yàn)程序 檢驗(yàn)菌株是否產(chǎn)生肉毒毒素,，或污染食品中是否有產(chǎn)毒素的肉毒梭菌存可按圖進(jìn)行檢驗(yàn)。
檢樣接種肝湯35℃培養(yǎng)3天 檢樣接種TPCYT肉湯2℃培養(yǎng)5天
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取液體部分7000r/min離心30min
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取上清中過滅菌
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血清學(xué)試驗(yàn) 禽眼瞼閉合試驗(yàn) 小白鼠腹腔注射及中和試驗(yàn)
（2）檢驗(yàn)方法
①毒素提取和濃縮,。取引起中毒的食品,、飼料以及病死動(dòng)物的胃內(nèi)容物，用生理鹽水做成懸液或取培養(yǎng)液的濾液500ml,，可加5％明礬水溶液2．5ml（或l％羥基氯化鋁5m1）,。按一個(gè)方向輕輕攪拌5min，靜置至結(jié)絮,，經(jīng)薄脫脂棉層過濾,。用lo一15ml的水洗下結(jié)絮,，以1000r／mir離心lmin（或待其自然沉降）,，棄去上清液收集絮凝物，用pH6．5的o．2％明膠緩沖液溶解絮疑物,。若室溫超過25℃,，應(yīng)在冰浴中處理標(biāo)本，以免毒素活性降低,。
②小白鼠腹腔接種法,。取15～25g的小白鼠分成3組，每組2～3只,。1組：腹腔接種被檢標(biāo)本的稀釋液o．5mi,；2組：腹腔接種經(jīng)沸水浴處理10min的被檢標(biāo)本稀釋液o．5ml；3組：腹腔接種被檢標(biāo)本與等量不同稀釋率的抗毒素混合液lml,。觀察2～6h,，之后早晚2次，共觀察4天,。若1組的小鼠出現(xiàn)明顯腹壁震顫,、縮陷、“失聲”（用鑷子夾尾巴時(shí)不能叫）,、隨后呼吸困難,、眼球突出,、zui后死亡；而2組,、3組小鼠仍然健活,。這表明被檢標(biāo)本中存在肉毒毒素。
③禽眼瞼閉合試驗(yàn),。在投有小白鼠的情況下,，可選用禽類（如雞、鴿子等）,，做眼瞼注射,。接種量可視禽的大小選用，一般注射0.1～0.3ml,。具體操作：用藍(lán)芯注射器從禽的內(nèi)眼角向下注射眼險(xiǎn)皮下,。注射后眼瞼隆起，幾分鐘后接種液被吸收,，眼瞼復(fù)原,。然后視注入液中的毒素含量多少，導(dǎo)致閉合時(shí)間的早晚不同,，毒素含量越多閉眼越快,。如注入含量為幾個(gè)小鼠致死量的毒素，一般可使試驗(yàn)動(dòng)物在1-l0h內(nèi)出現(xiàn)閉眼癥狀,；如毒素量超過對(duì)禽體的致死量,，則出現(xiàn)麻痹性癱瘓和呼吸困難等癥狀后經(jīng)幾十分鐘到幾小時(shí)死亡；如注射后20rain內(nèi)出現(xiàn)死亡,，應(yīng)判斷為注射失敗,。
④血清學(xué)試驗(yàn)
反向間接血凝試驗(yàn) 用各型抗毒素致敏已固定、鞣化的人紅細(xì)胞,。即可用于毒素檢測(cè),。本法可將毒素分型，且有較高的特異性和敏感性,。
對(duì)流免疫電泳 用pH8,，6的巴比妥緩沖液配制1％的瓊脂糖凝膠鋪于7cm×10cm玻璃板上，打出相距6mm的兩列孔,。其中一列分別加入被檢樣品稀釋液,、標(biāo)準(zhǔn)毒素稀釋液20,uL；另一列加入抗毒素血清20uL,。在60mA,、6～8V/cm條件下電泳45-60min，觀察有無(wú)沉淀線出現(xiàn)。本法重復(fù)性好,，但其敏感性不如反向間接血凝法,。
ELISA多用雙抗體夾心法檢測(cè)肉毒毒素
其方法為在聚苯乙烯酶標(biāo)反應(yīng)板上先加抗毒素血清包被過夜，洗滌后,，加入待檢標(biāo)本,，37℃下孵育90min，再經(jīng)洗滌后加入兔的抗毒素血清,，37℃孵育90min,，再次洗滌后加入羊抗兔IgG-酶結(jié)合物，37℃孵育90min,，洗滌后加入底物溶液,，其他操作同ELISA常規(guī)法。
人類肉毒中毒主要有3種類型,。a食物性肉毒中毒,。主要是由于進(jìn)食了含有肉毒毒素的食品引起的，也是人類肉毒中毒的zui普遍的一種形式,。b嬰兒肉毒中毒,。由于新生兒正常腸道菌群缺乏，其食人的肉毒梭菌芽孢可以萌發(fā),、繁殖,、產(chǎn)生毒素，從而引起嬰兒中毒,。c創(chuàng)傷性肉毒中毒,，類似于破傷風(fēng)，由于傷口處污染的肉毒梭菌芽孢繁殖,、產(chǎn)毒,，毒素從傷口進(jìn)入血液循環(huán)而導(dǎo)致，臨床上較少見,。
肉毒中毒的實(shí)驗(yàn)室診斷和定型主要是依據(jù)肉毒毒素、病原菌的檢出,，在此基礎(chǔ)上進(jìn)行產(chǎn)毒試驗(yàn)和診斷血清的中和試驗(yàn),。按GB／T4789.12-2003的方法規(guī)定要求，一個(gè)在流行病學(xué)調(diào)查和臨床診斷上已明確的食物中毒,，其樣品在實(shí)驗(yàn)室的確診上所需的zui少時(shí)間是10天,。
相關(guān)產(chǎn)品
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