本試劑僅供研究使用  

大鼠組織蛋白酶K（cath-K）elisa試劑盒使用說明書

試劑盒組成：48孔配置/96孔配置

說明書：1份

封板膜：2片（48）/2片（96）

密封袋：1個

目的：【大鼠組織蛋白酶K（cath-K）elisa試劑盒說明書】本試劑盒用于測定大鼠血清，血漿及相關(guān)液體樣本中介素2（IL-2）的含量,。

服務(wù)承諾： 

供貨期：款到發(fā)貨,。
工作時間內(nèi)免費的技術(shù)咨詢和指導(dǎo) 。請
為客戶提供來樣檢測服務(wù),，zui大限度實驗結(jié)果的有效性（免費代測）,。

試劑盒性能：

1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

2.批內(nèi)與批見應(yīng)分別小于9%和11%

保存條件及有效期：

1.試劑盒保存：2-8℃,。

2．有效期：6個月

檢測范圍：

0.2IU/L - 6IU/L 

試劑盒組成：

實驗原理：

【大鼠組織蛋白酶K（cath-K）elisa試劑盒說明書】本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中大鼠組織蛋白酶K（cath-K）水平,。用純化的大鼠組織蛋白酶K（cath-K）抗體包被微孔板，制成固相抗體,，往包被單抗的微孔中依次加入介素2（IL-2）,，再與HRP標記的介素2（IL-2）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物,，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB顯色,。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色,。顏色的深淺和樣品中的介素2（IL-2）呈正相關(guān),。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標準曲線計算樣品中大鼠組織蛋白酶K（cath-K）濃度,。

樣本處理及要求：

1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如出現(xiàn)沉淀,，應(yīng)再次離心。

2. 血漿：應(yīng)根據(jù)標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,，混合10-20分鐘后,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,，保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)該再次離心。

3. 尿液：用無菌管收集,，離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心,。胸腹水,、腦脊液參照實行。

4. 細胞培養(yǎng)上清：檢測分泌性的成份時,，用無菌管收集,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）。仔細收集上清,。檢測細胞內(nèi)的成份時,，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右,。通過反復(fù)凍融,，以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,，應(yīng)再次離心,。

5. 組織標本：切割標本后，稱取重量,。加入一定量的PBS,，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)?/font> 將標本勻漿充分,。離心20分鐘左右（2000-3000轉(zhuǎn)/分）,。仔細收集上清。分裝后一份待檢測,，其余冷凍備用,。

6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行,，提取后應(yīng)盡快進行實驗,。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存,，但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

計算：

以標準物的濃度為橫坐標,，OD值為縱坐標,，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度,；再乘以稀釋倍數(shù),；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式,，計算出樣品濃度,，再乘以稀釋倍數(shù),，即為樣品的實際濃度。

【大鼠組織蛋白酶K（cath-K）elisa試劑盒說明書】注意事項：

1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,，酶標包被板開封后如未用完,，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2． 濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出,，稀釋時可在水浴中加溫助溶,，洗滌時不影響結(jié)果。

3． 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,，并經(jīng)常校對其準確性,，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi),，如標本數(shù)量多,，推薦使用排槍加樣。

4． 請每次測定的同時做標準曲線,，做復(fù)孔,。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定,，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）,。

5． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染,。

6． 底物請避光保存,。

7． 嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8． 所有樣品,，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理,。

9． 本試劑不同批號組分不得混用。

10. 如與英文說明書有異,，以英文說明書為準,。