蛋白翻譯后修飾 (PTM) 是指蛋白質(zhì)合成后發(fā)生的化學修飾,，這些修飾可以改變蛋白質(zhì)的結構,、功能和定位，在細胞信號傳導、代謝和疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用,。瑞典Navinci公司研發(fā)的臨近鏈接技術（Proximity Ligation Assay, PLA）為研究PTMs提供了一種高靈敏度和高特異性的方法。

蛋白翻譯后修飾 (PTMs)

蛋白質(zhì)是細胞功能的主要執(zhí)行者,，而蛋白翻譯后修飾通過在蛋白質(zhì)上添加或移除特定化學基團,，精細地調(diào)控蛋白質(zhì)的活性,、定位、穩(wěn)定性及與其他分子的相互作用,。常見的 PTM 包括：

• 磷酸化：磷酸基團的添加，通常由蛋白激酶催化,，可以改變蛋白質(zhì)的活性,、定位和與其他蛋白質(zhì)的相互作用,。

• 糖基化：糖基的添加，可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性,、溶解度和與其他蛋白質(zhì)的相互作用。

• 泛素化：泛素蛋白的添加,，可以標記蛋白質(zhì)進行降解。

• 乙?；?/strong>乙酰基的添加,，可以影響蛋白質(zhì)的活性、穩(wěn)定性和與其他蛋白質(zhì)的相互作用,。

PTMs在細胞信號傳導,、代謝,、細胞周期調(diào)控、免疫反應和疾病發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮著重要作用,。例如,，磷酸化可以調(diào)節(jié)酶的活性,，糖基化可以影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性和定位,，泛素化可以標記蛋白質(zhì)進行降解。PTMs 異常與疾病相關,，以癌癥為例,，一些癌基因的過度磷酸化會導致細胞生長失控,，而一些抑癌基因的過度泛素化會導致其降解，從而促進腫瘤生長,。

Schematic PTM discovery timeline for 10 major PTMs

臨近連接技術 (PLA)

PLA技術由瑞典NAvinci技術公司開發(fā),，其核心原理基于臨近效應引發(fā)的信號放大（S?derberg, O. et al. (2006). Direct observation of individual endogenous protein complexes in situ by proximity ligation. Nature Methods, 3(12), 995 - 1000.）。

PLA 實驗流程：該技術使用兩對抗體,，每對抗體分別連接一段寡核苷酸序列。當這兩對抗體特異性地結合到目標蛋白復合物上彼此靠近（通常距離在40nm內(nèi)）時,，連接在抗體上的寡核苷酸序列也隨之靠近,。此時，通過DNA連接酶將相鄰的寡核苷酸連接起來,，形成一個完整的可擴增的DNA環(huán),。隨后,，利用滾環(huán)擴增技術（rolling circle amplification, RCA）對這個DNA環(huán)進行大量擴增，產(chǎn)生一條長鏈的單鏈DNA,，其上包含多個重復的序列單元,。最后,，通過熒光標記的互補寡核苷酸探針與擴增后的DNA鏈雜交，借助熒光顯微鏡或其他熒光檢測設備即可檢測到熒光信號,，熒光信號的強度與目標蛋白復合物的數(shù)量成正比,，從而實現(xiàn)對目標蛋白復合物的定性和定量檢測

PLA 技術檢測PTMs 應用案例

• 磷酸化HER2 檢測

采用Naveni pY HER2試劑盒檢測，Detection fluorophore TEX615

• 磷酸化EGFR 檢測

采用Naveni pY EGFR試劑盒檢測,，Detection fluorophore TEX615

同時也可以選擇斯達特各類修飾抗體搭配NaveniFlex 試劑盒實現(xiàn)多種磷酸化蛋白檢測