Southern Blot印跡分析可提供關于DNA 特性,、大小和豐度的信息,。這種經典技術根據(jù)DNA 大小,，通過電泳對DNA 片段進行分離,，并將其轉印到膜上，與標記的序列特異性探針雜交,，洗滌,，最后檢測標記DNA 條帶。賽默飛為Southern Blot雜交分析提供了的產品組合之一,。

從可靠的限制酶到快速便捷的E-Gel™預制瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)和BrightStar™Plus膜,， 我們的產品不僅有助于滿足您的Southern 印跡分析需求，還可以加快實驗進程,。

Southern Blot印跡雜交分步指南

第1步：DNA 消化

在目標限制酶切位點獲得完整的DNA 片段是Southern 印跡雜交中的關鍵步驟,。我們提供了一系列高品質DNA 限制性內切酶，可幫助您獲得清晰,、明確的Southern 印跡數(shù)據(jù),。每種限制內切酶經驗證都可以使用同一種通用緩沖液（L，M,，H,，K或T（+ BSA）），并提供推薦緩沖液,。

推薦工具：限制內切酶選擇工具

第2步：凝膠電泳

DNA 片段通常在瓊脂糖凝膠上電泳,，并根據(jù)片段分子量進行分離。也可以使用丙烯酰胺凝膠,，其對小片段DNA（<800bp）的分辨率較好,。

E-Gel®瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)非常適用于限制性酶切消化,、PCR 反應和質粒制備的快速,、高分辨率電泳。該系統(tǒng)包括凝膠電泳底座以及實時電泳觀察設備,。該系統(tǒng)利用E-Gel®預制凝膠以及即用型電極和核酸染料,。無需灌注凝膠，無需制備緩沖液,，無需組裝凝膠盒,。只需將DNA 樣品上樣，并開始電泳,。了解關于E-Gel®預制瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)的更多信息,。

我們提供多種DNA ladders 可用于準確預估DNA 的分子量大小，包括100 bp ladders 和1 Kb Plus ladders,。了解關于凝膠電泳DNA ladders 的更多信息,。

推薦產品：

? E-Gel®EX Starter Kit, 1%

? E-Gel®EX Starter Kit, 2%

? 100 bp DNA ladder

? E-Gel®1 Kb Plus DNA ladder

? 1 Kb Plus DNA ladder

? UltraPure™ DEPC-treated water

? UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled water

? UltraPure™ Agarose 1000

? UltraPure™ 0.5 M EDTA, pH 8.0

? UltraPure™ 5 M NaCl

? UltraPure™ Tris HCl

第3步: 轉印

電泳后，將DNA 轉印到帶正電尼龍膜上,。素探針一起使用,，可獲得最大的雜交信號,。傳統(tǒng)方法利用正向轉印方法將DNA 轉印過夜。為獲得可靠和一致的轉印結果并最小化背景,，強烈建議使用BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜,。該膜適合與放射性標記和非同位素探針一起使用，可獲得最大的雜交信號,。

為實現(xiàn)快速,、可重復的轉印，iBlot®7-Min Blot 可在7分鐘內將DNA 轉印到尼龍膜上,。使用iBlot®系統(tǒng),，無需其他緩沖液或液體，從而不會對結果造成差異,。

推薦產品：

? UltraPure™ DEPC-Treated Water

? UltraPure™ DNAse/RNase-Free Distilled Water

? UltraPure™ 20X SSC, 4 L

? UltraPure™ 20X SSC, 1 L

? UltraPure™ 20X SSPE

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（15 x 15 cm）

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（大卷,，30 cm x 3 m）

? BrightStar®-Plus帶正電尼龍膜（小卷，30 x 45 cm）

? 尼龍（.045微米,，8.3 x 7.3 cm）

? iBlot®7 Min Blot

? iBlot®DNA Transfer Stacks

第4步：探針標記

對于具有與目標序列同源序列的核酸探針,，使用放射性、熒光染料或酶（與相應底物孵育可產生化學發(fā)光信號）進行標記,。標記物的選擇取決于多種因素,，如探針或探針模板的性質、所需的靈敏度,、定量要求,、易用性和實驗時間等。

推薦產品：

? BioNick™ DNA Labeling System

? BioPrime®DNA Labeling System

? BrightStar®Psoralen-Biotin Nonisotopic Labeling Kit

? DECAprime™ II Kit, 30 rxns

? DECAprime™ II Kit, 100 rxns

? KinaseMax™ Kit

? RadPrime™ DNA Labeling System

? Random Primers DNA Labeling System

? ULYSIS®Alexa Fluor® 488 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 532 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 546 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 594 Nucleic Acid Labeling Kit

? ULYSIS®Alexa Fluor® 647 Nucleic Acid Labeling Kit

第5步：雜交&洗滌

雜交期間,，在促進互補序列雜交的條件下將標記探針與固定在印跡膜上的DNA 片段一起孵育,。與其他雜交溶液相比，ULTRAhyb®超靈敏雜交緩沖液在預雜交和雜交時可促進雜交且不增加背景,，使靈敏度提高100倍,。至少可以檢測到10,000個目標分子。由于ULTRAhyb®緩沖液提高了印跡的靈敏度,，所以通?？梢栽诙潭?小時內完成許多目標分子的雜交。

雜交后,，使用緩沖液洗滌多次,，除去未雜交的探針。低嚴格度洗滌（如,，使用2X SSC或SSPE）可除去雜交溶液和未雜交的探針,。高嚴格度洗滌（如，使用0.1X SSC或SSPE）可除去部分雜交的分子探針。結果是只有雜交的標記探針分子與目標區(qū)域的互補序列保持結合,。

推薦產品：

? ULTRAhyb®超靈敏雜交緩沖液

? ULTRAhyb®-Oligo

? 50X Denhardt’s Solution

? 鮭魚精子DNA（剪切的,，10mg/ml

? UltraPure™小牛胸腺DNA溶液

? UltraPure™鯡魚精子DNA溶液

? UltraPure™鮭魚精子DNA溶液

? 甲酰胺（去離子）

? UltraPure™ 20X SSC, 1L

? UltraPure™ 20X SSPE

第6步：檢測

在檢測步驟中，使用所用標記物對應的方法檢測結合的標記探針,。例如,，可以使用X射線膠片或磷光成像儀器檢測放射性標記探針，以及通過孵育化學發(fā)光底物并將印跡曝光到X射線膠片來檢測酶標記探針,。

BrightStar®BioDetect™ 試劑盒包含檢測生物素化DNA探針所需的試劑和材料,。這套完整的試劑盒經過優(yōu)化，可與BrightStar®-Plus膜一起使用,，提供了可兼容Southern,、Northern和點印跡的低背景、高靈敏度,、非同位素檢測,。BrightStar®BioDetect™ 試劑盒利用一種最明亮和壽命最長的化學發(fā)光底物——CDP-Star® 底物——具有最高的靈敏度，并且可在2天內進行多次曝光,。

推薦產品：

? BrightStar®BioDetect™ Kit

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