新生大鼠脊髓來源的小膠質(zhì)細(xì)胞分離和培養(yǎng)

來源：伊萊博生物科技（上海）有限公司 2025年07月09日 13:55

一,、解剖新生大鼠的脊髓組織

1. 用溫?zé)岬纳睇}水擦拭P2天的新生鼠；

2. 用70%乙醇沖洗P2新生鼠,；

3. 分離脊髓，放入裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中,；

4. 剝離脊膜,，轉(zhuǎn)移脊髓到裝有L-15溶液的培養(yǎng)皿中。

二,、制備混合膠質(zhì)細(xì)胞群

1. 清洗所有P2新生鼠的脊髓組織,；

2. 把脊髓剪成小塊；

3. 加入新鮮的DMEMwan全培養(yǎng)基4-5ml,，吹打10-15次,；

4. 用100um的濾器過濾；

5. 離心2500RCF/5min/4℃,。

三,、種植混合膠質(zhì)細(xì)胞群

1. 4個(gè)P2新生鼠脊髓組織混合細(xì)胞群種到一個(gè)T-75培養(yǎng)瓶中；

2. 第5天全量換液,，之后每3天全量換液,。

四、原代小膠質(zhì)細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

1. 2-3周,，當(dāng)混合的細(xì)胞群長滿T-75培養(yǎng)瓶底,；

2. 在37℃以150rps的速度搖動(dòng)T-75培養(yǎng)瓶2小時(shí);

3. 用移液管從所有T-75培養(yǎng)瓶中收集培養(yǎng)基，不要破壞培養(yǎng)瓶表面的星形膠質(zhì)細(xì)胞層,；

4. 離心2500RCF/5min/4℃,；

5. 吸取上清液，將沉淀重懸于1 ml小膠質(zhì)細(xì)胞培養(yǎng)基中,；

6. 計(jì)數(shù),；

7. 種植小膠質(zhì)細(xì)胞。

五,、代表性結(jié)果

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