HSF95 Insect Cell Medium（CW003）昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

一,、產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱(chēng)：HSF95 昆蟲(chóng)細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號(hào)：CW003

產(chǎn)品規(guī)格：1L

適用范圍：sf9,、High Five 等昆蟲(chóng)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及桿狀病毒載體系統(tǒng)（BEVS）的重組蛋白瞬時(shí)表達(dá)

二、產(chǎn)品描述

CW003 培養(yǎng)基為無(wú)血清即用型全營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基,，專(zhuān)為昆蟲(chóng)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)設(shè)計(jì),，包含細(xì)胞生長(zhǎng)所需的氨基酸、維生素,、碳水化合物,、微量元素及特殊促生長(zhǎng)因子，無(wú)需額外添加血清或其他成分即可直接使用,，適用于細(xì)胞馴化,、高密度培養(yǎng)及工業(yè)化生產(chǎn)場(chǎng)景。

三,、產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 無(wú)血清配方：排除動(dòng)物源成分干擾,，批次穩(wěn)定性?xún)?yōu)異，符合生物制藥的安全性要求

2. 即開(kāi)即用：預(yù)優(yōu)化全成分體系,，無(wú)需補(bǔ)加任何試劑,，顯著降低操作復(fù)雜度

3. 高效馴化：支持昆蟲(chóng)細(xì)胞從貼壁到懸浮、或從其他培養(yǎng)基直接 / 漸進(jìn)式馴化,，馴化成功率＞95%

4. 高密度支持：細(xì)胞峰值密度可達(dá)

1.5×107cells/mL

以上（優(yōu)化培養(yǎng)條件下）

5. 表達(dá)增強(qiáng)：與桿狀病毒感染兼容,，重組蛋白產(chǎn)量較傳統(tǒng)培養(yǎng)基提升 30-50%

四、基礎(chǔ)參數(shù)

五、使用方法

5.1 細(xì)胞馴化與傳代

5.1.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)條件

• 溫度：27±0.5℃

• 搖床配置：帶擋板搖瓶,，轉(zhuǎn)速 110-130 rpm,，裝液量≤30% 瓶體積

• 傳代密度：

0.8?1.2×106?′?c???eˋ??/mL

（臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)）

5.1.2 直接馴化（適用于懸浮適應(yīng)細(xì)胞）

1. 按常規(guī)傳代比例（如 1:3 稀釋?zhuān)┲苯佑?span> CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基

2. 維持培養(yǎng)條件不變，連續(xù)傳代 2-3 次即可完成適應(yīng)

5.1.3 漸進(jìn)式馴化（適用于貼壁細(xì)胞或敏感細(xì)胞）

1. 起始階段：原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞,，連續(xù)傳代 2-3 次至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（活力＞95%）

2. 混合過(guò)渡：

• 第 1 代：原培養(yǎng)基: CW003 = 75:25,，細(xì)胞密度

0.8×106cells/mL

• 第 2 代：比例調(diào)整為 50:50，密度

1.0×106cells/mL

• 第 3-4      代：比例提升至 10:90,，密度

1.1×106cells/mL

,，每 48 小時(shí)傳代

3. wan全適應(yīng)：過(guò)渡至 100% CW003 培養(yǎng)基，連續(xù)傳代 3 次,，若細(xì)胞倍增時(shí)間＜24 小時(shí)且活力＞92%,，馴化完成

5.2 細(xì)胞復(fù)蘇

1. 快速解凍：從液氮中取出凍存管，37℃水浴震蕩,，120 秒內(nèi)完成解凍（殘留少量冰晶時(shí)停止）

2. 換液操作：

• 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入 50mL 離心管,，加入 10mL 預(yù)熱（27℃）的 CW003 培養(yǎng)基

• 離心條件：175×g,，5 分鐘，棄上清

• 用      20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸,，接種至搖瓶,，初始密度

0.3?0.5×106cells/mL

5.3 細(xì)胞凍存

1. 細(xì)胞篩選：選擇對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期（活力＞98%）、密度

2.0?2.5×106cells/mL

的細(xì)胞

2. 凍存液配制（現(xiàn)用現(xiàn)配）：

• 45% 新鮮 CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清 + 10% DMSO（體積比）

• 混勻后      4℃預(yù)冷,，避免長(zhǎng)時(shí)間存放

3. 操作步驟：

• 離心收集細(xì)胞：175×g,，5 分鐘，棄上清

• 用預(yù)冷凍存液重懸至密度

1.0?2.0×107cells/mL

（推薦

2.5×107cells/mL

）

• 分裝至凍存管（1mL / 支）,，標(biāo)注信息后放入 4℃預(yù)冷的程序降溫盒（含異丙醇）

• -80℃過(guò)夜（降溫速率 1℃/ 分鐘）,，次日轉(zhuǎn)入液氮保存

六、注意事項(xiàng)

1. 無(wú)菌操作：所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行,，避免交叉污染

2. 培養(yǎng)基管理：開(kāi)封后需避光儲(chǔ)存,，避免反復(fù)凍融；使用前需平衡至室溫（20-25℃）

3. 過(guò)程監(jiān)控：高密度培養(yǎng)時(shí)建議每 24 小時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度,、活力及 pH 值,，必要時(shí)進(jìn)行補(bǔ)料或氣體調(diào)節(jié)

4. 病毒感染：桿狀病毒感染前建議將細(xì)胞密度調(diào)整至

1.0?1.5×106cells/mL

，MOI 值根據(jù)具體蛋白優(yōu)化

七,、質(zhì)量保證

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)檢,，包含以下檢測(cè)項(xiàng)：

• 無(wú)菌檢測(cè)（細(xì)菌、真菌,、支原體）

• 內(nèi)毒素檢測(cè)（≤10 EU/mL）

• 細(xì)胞增殖測(cè)試（sf9 細(xì)胞倍增時(shí)間＜22 小時(shí)）

• 表達(dá)兼容性測(cè)試（GFP 蛋白表達(dá)效率＞90%）