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HSF95 Insect Cell Medium(CW003)昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品說明書

來源:上海徠同生物科技有限公司   2025年07月09日 11:21  

HSF95 Insect Cell MediumCW003)昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基產(chǎn)品說明書

一、產(chǎn)品基本信息

產(chǎn)品名稱HSF95 昆蟲細(xì)胞培養(yǎng)基

產(chǎn)品貨號(hào)CW003

產(chǎn)品規(guī)格1L

適用范圍sf9,、High Five 等昆蟲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)及桿狀病毒載體系統(tǒng)(BEVS)的重組蛋白瞬時(shí)表達(dá)

二,、產(chǎn)品描述

CW003 培養(yǎng)基為無血清即用型全營養(yǎng)培養(yǎng)基,專為昆蟲細(xì)胞懸浮培養(yǎng)設(shè)計(jì),,包含細(xì)胞生長所需的氨基酸、維生素、碳水化合物,、微量元素及特殊促生長因子,,無需額外添加血清或其他成分即可直接使用,適用于細(xì)胞馴化,、高密度培養(yǎng)及工業(yè)化生產(chǎn)場(chǎng)景,。

三、產(chǎn)品特點(diǎn)

  1. 無血清配方:排除動(dòng)物源成分干擾,,批次穩(wěn)定性優(yōu)異,,符合生物制藥的安全性要求

  1. 即開即用:預(yù)優(yōu)化全成分體系,無需補(bǔ)加任何試劑,,顯著降低操作復(fù)雜度

  1. 高效馴化:支持昆蟲細(xì)胞從貼壁到懸浮,、或從其他培養(yǎng)基直接 / 漸進(jìn)式馴化,馴化成功率>95%

  1. 高密度支持:細(xì)胞峰值密度可達(dá)

1.5×107cells/mL

以上(優(yōu)化培養(yǎng)條件下)

  1. 表達(dá)增強(qiáng):與桿狀病毒感染兼容,,重組蛋白產(chǎn)量較傳統(tǒng)培養(yǎng)基提升 30-50%

四,、基礎(chǔ)參數(shù)

參數(shù)

指標(biāo)

pH

6.2-6.425℃

滲透壓

320-350 mOsm/kg

儲(chǔ)存條件

2-8℃避光保存,避免凍結(jié)

保質(zhì)期

12 個(gè)月(未開封)

開封后建議

4℃避光保存,,30 天內(nèi)用完

五,、使用方法

5.1 細(xì)胞馴化與傳代

5.1.1 基礎(chǔ)培養(yǎng)條件

  • 溫度27±0.5℃

  • 搖床配置:帶擋板搖瓶,轉(zhuǎn)速 110-130 rpm,,裝液量≤30% 瓶體積

  • 傳代密度

0.8?1.2×106?′?c???eˋ??/mL

(臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù))

5.1.2 直接馴化(適用于懸浮適應(yīng)細(xì)胞)

  1. 按常規(guī)傳代比例(如 1:3 稀釋)直接用 CW003 培養(yǎng)基替換原培養(yǎng)基

  1. 維持培養(yǎng)條件不變,,連續(xù)傳代 2-3 次即可完成適應(yīng)

5.1.3 漸進(jìn)式馴化(適用于貼壁細(xì)胞或敏感細(xì)胞)

  1. 起始階段:原培養(yǎng)基中復(fù)蘇細(xì)胞,連續(xù)傳代 2-3 次至對(duì)數(shù)生長期(活力>95%

  1. 混合過渡

  • 1 代:原培養(yǎng)基: CW003 = 75:25,,細(xì)胞密度

0.8×106cells/mL

  • 2 代:比例調(diào)整為 50:50,,密度

1.0×106cells/mL

  • 3-4      代:比例提升至 10:90,密度

1.1×106cells/mL

,,每 48 小時(shí)傳代

  1. wan全適應(yīng):過渡至 100% CW003 培養(yǎng)基,,連續(xù)傳代 3 次,若細(xì)胞倍增時(shí)間<24 小時(shí)且活力>92%,,馴化完成

5.2 細(xì)胞復(fù)蘇

  1. 快速解凍:從液氮中取出凍存管,,37℃水浴震蕩,120 秒內(nèi)完成解凍(殘留少量冰晶時(shí)停止)

  1. 換液操作

  • 將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)入 50mL 離心管,,加入 10mL 預(yù)熱(27℃)的 CW003 培養(yǎng)基

  • 離心條件:175×g,,5 分鐘,棄上清

  •      20-30mL 預(yù)熱培養(yǎng)基重懸,,接種至搖瓶,,初始密度

0.3?0.5×106cells/mL

5.3 細(xì)胞凍存

  1. 細(xì)胞篩選:選擇對(duì)數(shù)生長期(活力>98%)、密度

2.0?2.5×106cells/mL

的細(xì)胞

  1. 凍存液配制(現(xiàn)用現(xiàn)配):

  • 45% 新鮮 CW003 培養(yǎng)基 + 45% 細(xì)胞培養(yǎng)上清 + 10% DMSO(體積比)

  • 混勻后      4℃預(yù)冷,,避免長時(shí)間存放

  1. 操作步驟

  • 離心收集細(xì)胞:175×g,,5 分鐘,,棄上清

  • 用預(yù)冷凍存液重懸至密度

1.0?2.0×107cells/mL

(推薦

2.5×107cells/mL

  • 分裝至凍存管(1mL / 支),標(biāo)注信息后放入 4℃預(yù)冷的程序降溫盒(含異丙醇)

  • -80℃過夜(降溫速率 1℃/ 分鐘),,次日轉(zhuǎn)入液氮保存

六,、注意事項(xiàng)

  1. 無菌操作:所有操作需在生物安全柜中進(jìn)行,避免交叉污染

  1. 培養(yǎng)基管理:開封后需避光儲(chǔ)存,,避免反復(fù)凍融,;使用前需平衡至室溫(20-25℃

  1. 過程監(jiān)控:高密度培養(yǎng)時(shí)建議每 24 小時(shí)監(jiān)測(cè)細(xì)胞密度、活力及 pH 值,,必要時(shí)進(jìn)行補(bǔ)料或氣體調(diào)節(jié)

  1. 病毒感染:桿狀病毒感染前建議將細(xì)胞密度調(diào)整至

1.0?1.5×106cells/mL

,,MOI 值根據(jù)具體蛋白優(yōu)化

七、質(zhì)量保證

本產(chǎn)品經(jīng)嚴(yán)格質(zhì)檢,,包含以下檢測(cè)項(xiàng):

  • 無菌檢測(cè)(細(xì)菌,、真菌、支原體)

  • 內(nèi)毒素檢測(cè)(≤10 EU/mL

  • 細(xì)胞增殖測(cè)試(sf9 細(xì)胞倍增時(shí)間<22 小時(shí))

  • 表達(dá)兼容性測(cè)試(GFP 蛋白表達(dá)效率>90%

 


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