購(gòu)買 QPCR 實(shí)時(shí)熒光定量?jī)x時(shí),,通常需要重點(diǎn)關(guān)注以下幾類參數(shù):
一,、熒光檢測(cè)通道相關(guān)參數(shù)
1,、通道數(shù)量:
不同的熒光染料需要對(duì)應(yīng)不同的檢測(cè)通道,,常見的如 FAM、VIC,、ROX 等染料,。如果實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常需要同時(shí)檢測(cè)多種目標(biāo)基因,或者要進(jìn)行多重?zé)晒舛?PCR 檢測(cè),,那就需要選擇通道數(shù)量較多的儀器,,比如具有 4 通道、5 通道甚至更多通道的設(shè)備,,以滿足多樣本,、多指標(biāo)同時(shí)檢測(cè)的需求,。
2、檢測(cè)靈敏度:
對(duì)于低豐度的基因模板,,儀器能否精準(zhǔn)檢測(cè)到熒光信號(hào)就很關(guān)鍵,。靈敏度高的儀器可以檢測(cè)到極微量的核酸擴(kuò)增產(chǎn)生的熒光變化,一般以能檢測(cè)到的拷貝數(shù)來衡量,,例如有的儀器可以檢測(cè)到單拷貝甚至更低的起始模板量,,這在檢測(cè)痕量核酸時(shí)優(yōu)勢(shì)明顯。
3,、熒光檢測(cè)線性范圍:
它反映了儀器在多大的核酸濃度區(qū)間內(nèi),,熒光信號(hào)強(qiáng)度與模板濃度能保持良好的線性關(guān)系。較寬的線性范圍意味著在檢測(cè)高濃度和低濃度樣本時(shí)都能準(zhǔn)確進(jìn)行定量分析,,例如線性范圍達(dá)到 6 - 8 個(gè)數(shù)量級(jí)的儀器,,可適應(yīng)更多不同濃度樣本的檢測(cè)需求,無需對(duì)樣本過度稀釋或濃縮,。
二,、溫度控制相關(guān)參數(shù)
1、升降溫速率:
快速的升降溫有助于縮短整個(gè) PCR 反應(yīng)的時(shí)間,,提高實(shí)驗(yàn)效率,。比如升降溫速率達(dá)到每秒 3℃ - 5℃甚至更高的儀器,相比速率低的設(shè)備,,可以在更短時(shí)間內(nèi)完成熱循環(huán)過程,,尤其在處理大量樣本時(shí)能節(jié)省不少時(shí)間。
2,、溫度準(zhǔn)確性和均勻性:
溫度準(zhǔn)確性是指儀器實(shí)際達(dá)到的溫度與設(shè)定溫度的偏差程度,,一般要求偏差在較小范圍內(nèi),如 ±0.1℃ - ±0.5℃,,這對(duì)于確保 PCR 反應(yīng)在準(zhǔn)確的退火,、延伸等溫度條件下進(jìn)行很重要。溫度均勻性則關(guān)乎儀器不同孔位之間溫度的一致性,,要保證各個(gè)反應(yīng)孔的溫度都能均勻穩(wěn)定,,避免因溫度差異導(dǎo)致擴(kuò)增效率不一致,影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性,。
三,、樣本通量相關(guān)參數(shù)
1、反應(yīng)模塊規(guī)格:
常見的有 96 孔,、384 孔等規(guī)格,。如果日常實(shí)驗(yàn)樣本量較大,選擇 384 孔的模塊可以一次性處理更多樣本,減少批次間的誤差,,提高整體檢測(cè)效率;而如果樣本量相對(duì)較少,,96 孔模塊可能就足以滿足需求,,且相對(duì)更節(jié)省試劑等耗材成本。
2,、是否支持自動(dòng)化程度:
部分高級(jí)儀器可以與自動(dòng)化液體處理工作站等設(shè)備聯(lián)用,,實(shí)現(xiàn)樣本加樣、反應(yīng)體系配置等流程的自動(dòng)化,,極大提高工作效率,,適合高通量、大規(guī)模檢測(cè)的實(shí)驗(yàn)室使用,。
四,、軟件分析功能相關(guān)參數(shù)
1、數(shù)據(jù)分析能力:
好的儀器配套軟件應(yīng)具備多種定量分析方法,,比如絕對(duì)定量,、相對(duì)定量(如采用 ΔΔCt 法等),還能進(jìn)行熔解曲線分析,、擴(kuò)增效率計(jì)算等,,同時(shí)可以方便地生成直觀的圖表,如擴(kuò)增曲線,、熔解曲線等圖形展示,,便于研究者直接觀察和分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
2,、兼容性和拓展性:
軟件要能兼容常見的數(shù)據(jù)格式,,方便與其他實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)或數(shù)據(jù)分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)交互,并且具備一定的拓展功能,,例如后續(xù)可以根據(jù)新的實(shí)驗(yàn)需求添加新的分析模塊等,。
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