一,、背景

葉酸測定培養(yǎng)基用于樣品中葉酸測定,，是利用干酪乳桿菌ATCC7469對樣品中的葉酸含量進行微生物法測定。方法的測試菌株為干酪乳桿菌ATCC7469,。葉酸培養(yǎng)基含有干酪乳桿菌生長所必需的除葉酸外所有營養(yǎng)成分,。而葉酸是干酪乳桿菌ATCC7469生長所必需的B族維生素。

配方(g/L)：酸水解酪蛋白：10.0,；葡萄糖：40.0,；乙酸鈉：40.0；磷酸二氫鉀：1.0,；磷酸氫二鉀：1.0,；DL-色氨酸 ：0.2；L-胱氨酸鹽酸鹽：0.5,；腺嘌呤 ：0.01,；鳥嘌呤鹽酸鹽：0.01；尿嘧啶：0.01,；黃嘌呤：0.02,；吐溫80：0.1；還原型谷胱甘肽：0.005,；無水硫酸鎂：0.2,；氯化鈉：0.02；硫酸亞鐵：0.02,；硫酸錳：0.015,；核黃素：0.001；對氨基苯甲酸：0.002,；鹽酸吡哆醇：0.004,；鹽酸硫胺素：0.0004,；泛酸鈣：0.0008,；生物素：0.00002；pH6.7±0.125℃,。

二,、用法

1、用100ml去離子水重懸9.4g本產(chǎn)品,，加入50mg抗壞血酸,。

2,、混合均勻，分裝時使沉淀均勻分布,。每個測定試管中分裝5ml,。

3、加入標(biāo)準(zhǔn)樣或待測樣,。用去離子水定容至10ml,。

4、121°C滅菌5min,。立即冷卻,。

三、應(yīng)用

用于微孔板法測定乳粉中葉酸的含量研究：

葉酸其實是B族維生素中的一種,它是人體健康中的部分,所以葉酸的每日葉酸攝取量和葉酸的測定方法及其毒理學(xué)作用的研究都是現(xiàn)如今研究的熱門話題,而且葉酸的測定方法是研究這些問題的基礎(chǔ)和前提,所以葉酸的檢測方法則變得特別重要,。如何準(zhǔn)確測出葉酸的含量就是衡量檢測方法好壞的重要標(biāo)準(zhǔn)之一,。

微生物法是測定葉酸的常用方法,可以準(zhǔn)確的檢測出具有生化活性的葉酸,結(jié)果表示出的是基體中的葉酸含量,這也是微生物測定法不同于其他的檢測方法的的優(yōu)點,是儀器測定方法難以達到的。現(xiàn)在大部分國際標(biāo)準(zhǔn)的測定方法都將微生物檢測法當(dāng)做多種維生素檢驗的標(biāo)準(zhǔn),。

在我國現(xiàn)在實行的國家檢測標(biāo)準(zhǔn)里也仍然用微生物方法檢測乳制品和嬰幼兒配方食品中的葉酸,。酪乳酸桿菌（ATCC 7469）相對葉酸有的特異性,葉酸作為該菌必需的生長因子,而且在一定的生長環(huán)境下,該菌生長和增殖的速率與體系中葉酸的含量具有一定的比例關(guān)系,微生物法則是依據(jù)這個原理對葉酸定量分析的。

微生物法的檢測過程一般會分為以下六個檢測步驟:1)工作菌懸液的制備;2)檢測樣品和工作標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備;3)測試培養(yǎng)基的制備,現(xiàn)在可以應(yīng)用成品培養(yǎng)基;4)滅菌及接種和培養(yǎng);5)樣品測定,主要方法是光密度法;6)計算,。本文基于對微生物方法的原理和基本的分析步驟制定了微孔板的測定方法,通過對十組的未知濃度的樣品重復(fù)五次測定,得到樣品的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均<2%;通過的已知濃度樣品的測定,得出實驗的相對誤差<2%;實驗的回收率范圍為98%-106%;線性的相關(guān)系數(shù)也可以達到0.9995以上,；

同次實驗的平行孔間的變異系數(shù)也都<5%。所以,微孔板法可以用來準(zhǔn)確的測定乳粉中葉酸的含量,并且相比較傳統(tǒng)的試管方法,可以大量的縮短實驗的操作時間,降低實驗的難度,同時節(jié)約了實驗成本,。

微孔板法的優(yōu)勢在于成本少,、靈敏度高、適用于數(shù)量大的樣品測定,、可操作性強;隨著當(dāng)代的科技迅速發(fā)展,很多的儀器檢測方法都被開發(fā)出來,用以檢測低含量的葉酸食品,。

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